重金属を選択的にターゲティングするタンパク質分子のデザイン

选择性靶向重金属的蛋白质分子的设计

基本信息

批准号：
10145108
负责人：
室岡義勝
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

生体内の重金属を結合するSH基高含有タンパク質をタンパク質工学的にデザインし直し、アミノ酸配列を人工的に改変して、特定の重金属を識別する金属タンパク質を創製し、重金属解毒や医療医薬または環境中の重金属モニターや集積除去に関わる新素材機能の開発を目的とし、ヒト由来の重金属結合タンパク質メタロチオネインを立体構造と金属結合機能解析のモデルに下記の研究を行った。1. 大腸菌による重金属結合タンパク質の生産系の開発:GST-hMT-II融合法によって、ヒトメタロチオネインおよびその変異タンパク質を大腸菌で大量発現させることができた。2. 重金属結合タンパク質の発現生産効率評価のための簡易測定法の開発:大腸菌で大量生産したメタロチオネインタンパク質の可溶化条件を検討し、可溶化の後、FactorXで切断して、メタロチオネインタンパク質の精製条件を確立した。現在、米国ハーバードメディカルスクールにおいて、野生と変異タンパク質の生化学的諸性質を解析中である。3. 三次構造モデルの構築と重金属特異的結合能を有するタンパク質の開発:三次構造モデルを構築し、コンピューターでディスプレイできるソフトを開発した。

使用人类衍生的重金属结合蛋白进行以下研究，该蛋白将体内重金属结合为蛋白质工程，人为地改变了氨基酸序列，以创建鉴定特定重金属的金属蛋白，并开发与重金属排毒，医用药物或环境相关的新材料功能，以及与重金属监测和累积量的新材料的开发。使用人类衍生的重金属结合蛋白金属硫硫代蛋白作为分析三维结构和金属结合功能的模型进行了以下研究。 1。通过大肠杆菌生产重金属结合蛋白的系统的开发：GST-HMT-II融合方法允许大量的人甲硫代蛋白及其突变蛋白在大肠杆菌中表达。 2。开发用于评估重金属结合蛋白的表达产生效率的简单测定：测量金属硫硫代蛋白蛋白的溶解条件，检查了大肠杆菌中质量产生的金属硫硫代蛋白蛋白，并在溶解后，用Factorx裂解裂解，以建立金属硫硫蛋白蛋白的净化条件。目前，正在美国哈佛医学院分析野生和静utein的生化特性。 3。建造三级结构模型和具有重金属特异性结合能力的蛋白质的开发：我们已经构建了可以在计算机上显示的三级结构模型和开发的软件。