腸管寄生性原虫赤痢アメーバのプロテアーゼ輸送機構の解明

阐明肠道寄生原生动物溶组织内阿米巴的蛋白酶转运机制

• 批准号: 18790291
• 负责人: 津久井 久美子
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18790291/
• 关键词: 感染症; 赤痢アメーバ; 小胞輸送; レトロマー; プロテアーゼ; AP複合体

本研究では赤痢アメーバシステインプロテアーゼ(CP)輸送の分子機構の解明を行った。以前我々が報告したCP輸送に関与するレトロマー複合体、またCPに結合する分子の同定を試みた。レトロマー複合体の構成分子であるVps35または主要なCPの一つであるCP5をHAタグとの融合タンパク質として発現させた強発現株を作成し、抗HA抗体を用いた免疫沈降を行った。SDS-PAGEの後銀染色を行い、親株では見られず、それぞれの強発現株でのみ見いだせるバンドの検索を行った。それぞれから候補となるバンドを見出し、質量分析を行ったが、Vps35からは既知のレトロマー複合体の構成分子しか見いだせなかった。一方CP5の強発現株から見出された約100kDaのバンドはシグナルシークエンスと膜貫通ドメインを持つタンパク質であり、そのC末端部分には細胞内輸送に重要なアダプタータンパク質(AP)複合体の結合モチーフ(YxxΦモチーフ)が存在していた。さらに赤痢アメーバゲノムデータベースを検索したところこの分子と相同な分子が他に10存在しうち8個にYxxΦモチーフが存在していた。cysteine protease binding family(CPBF)と名付けたこれらの分子は赤痢アメーバで初めて見出されたAP複合体を介した輸送経路に関与する分子であると考えられ、今後行うCP輸送の分子機構解明に向け、重要な知見を得ることができた。

In this study, the patients with dysentery and dysentery were sent to molecular institutions to explain the problem. CP was sent to the molecular organization to explain the problem. In the past, we used to report that the CP delivery system was the same as that of the complex, the combination of the CP and the molecular template. The molecular composition of the complex was characterized by CP, CP5, HA, fusion, fusion, anti-HA antibody, anti-HA antibody and anti-DNA antibody. After SDS-PAGE, the lines were stained, the strains were stained, and the strains were strongly stained. We need to know more about the molecular composition of the complex, such as the molecular structure of the complex, which is known to be detected, quantitative analysis and Vps35 analysis. One side of the CP5 strain showed that there was a significant difference between the two parts of the cell in terms of 100kDa, Yxx, and so on. There was a significant difference between the two parts of the C-terminal region. There are 8 Yxx molecules in the same molecule because of the presence of dysentery. Cysteine protease binding family (CPBF) is responsible for molecular dysentery. At the beginning of the experiment, the AP complex was introduced, the route and the molecular were tested, and now the CP was sent to the molecular organization for information and information.