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1分子蛍光観察による1細胞プロテオーム解析法の開発

利用单分子荧光观察开发单细胞蛋白质组分析方法

基本信息

批准号：
22KJ3130
负责人：
日高拓也
金额：
$ 3.08万
依托单位：
Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究で実現を目指す1細胞プロテオーム解析システムに必要な技術要素として、1. マイクロ流路デバイスによる1細胞サンプルの調製、2. マイクロウェルゲルを用いたハイスループットな電気泳動、3. 光シート顕微鏡による超高感度定量の3つが挙げられる。2022年度はマイクロ流路デバイスによる1細胞サンプル調製、およびマイクロウェルゲルによるサンプル捕捉の効率が著しく低いという課題に直面し、本研究で求めるハイスループットな解析が難しいことが分かったため、システムの大幅な変更を行った。1細胞サンプルの調製方法を1細胞ソーティングとマイクロビーズへのタンパク質吸着を組み合わせたものに切り替え、さらに得られるサンプルをロスなく電気泳動するためにゲルの設計を変更した。まだ実験的な検証が必要だが、この手法により一度のランで300程度の1細胞サンプルが解析できると考えている。また並行して2021年度に作成した顕微鏡制御システムの拡張と画像解析プログラム作成を行った。前者は特に、ビーズ位置を自動検出するプログラムを追加し、サンプルのある箇所のみを観察するようステージ等を制御することで、ゲル観察にかかる時間の最小化を試みている。また後者は観察時に生じるZ方向のずれを補正するプログラムに加え、crop, deskew, Z projectionまでをパイプライン化できており、今後は1分子検出とその定量を行うプログラムを追加する予定である。その他マイクロビーズや蛍光色素、電気泳動条件の検討を行い、電気泳動におけるS/N比の向上や広範囲の分子量領域でのバンド分離を達成することができた。

This study is aimed at: 1. the necessary technical elements for the analysis of cell culture; 2. 1. Cell modulation, 2. 3. Electrophoresis Light microscope with ultra-high sensitivity and quantification In 2022, the efficiency rate of cell service modulation, cell service acquisition, cell service acquisition, cell service acquisition, 1. Cell phone number modulation method 1. Cell phone number modulation method 1. Cell phone number modulation method 2. Cell phone number modulation method 3. Cell phone number modulation method 4. Cell phone number modulation method 5. Cell phone number modulation method 6. Cell phone number modulation method 7. Cell phone number modulation method 8. Cell phone number modulation method 7. Cell phone number modulation method 8. Cell phone number 9. Cell phone number modulation method 8. Cell phone number modulation method 8. Cell phone number 9. Cell phone number modulation method 8. The analysis of the data is necessary, and the method is to analyze the data at a level of 300. In 2021, the micro-mirror system and the image analysis system were created. The former attempts to minimize the time required for the detection of a particular location, such as the location of the search engine, the location of the search engine, and so on. The latter is the result of a correction in the Z direction during observation, and the addition of a predetermined number of molecules in the future, including crop, deskew, Z projection. We are currently conducting discussions on other fluorescent pigments and electromigration conditions, and we are able to achieve product separation in the molecular weight field with upward S/N ratios and broad ranges of electromigration.

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Development of DNA binding ligands toward gene therapy of mitochondrial diseases

开发用于线粒体疾病基因治疗的 DNA 结合配体

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Takuya Hidaka;Ganesh Namasivayam Pandian;Toshikazu Bando;Hiroshi Sugiyama
通讯作者：
Hiroshi Sugiyama

Photo-Controllable Phase Transition of Arylazopyrazole-Conjugated Oligonucleotides

DOI：
10.1021/acs.bioconjchem.1c00302
发表时间：
2021-09-09
期刊：
BIOCONJUGATE CHEMISTRY
影响因子：
4.7
作者：
Hidaka, Takuya;Wee, Wen Ann;Park, Soyoung
通讯作者：
Park, Soyoung

DNA結合性化合物を用いた塩基配列選択的なミトコンドリアDNA制御

使用 DNA 结合化合物进行序列选择性线粒体 DNA 调控

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Hidaka Takuya;Wee Wen Ann;Yum Ji Hye;Sugiyama Hiroshi;Park Soyoung;日高拓也
通讯作者：
日高拓也

Sequence-Specific DNA Binders for the Therapy of Mitochondrial Diseases

用于治疗线粒体疾病的序列特异性 DNA 结合剂

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
Takuya Hidaka;Ganesh Namasivayam Pandian;Toshikazu Bando;Hiroshi Sugiyama;Takuya Hidaka
通讯作者：
Takuya Hidaka

Targeted elimination of mutated mitochondrial DNA by a multi-functional conjugate capable of sequence-specific adenine alkylation

通过能够进行序列特异性腺嘌呤烷基化的多功能缀合物，靶向消除突变的线粒体 DNA

DOI：
10.1016/j.chembiol.2021.08.003
发表时间：
2022
期刊：
Cell Chemical Biology
影响因子：
8.6
作者：
Hidaka Takuya;Hashiya Kaori;Bando Toshikazu;Pandian Ganesh N.;Sugiyama Hiroshi
通讯作者：
Sugiyama Hiroshi