1細胞リン酸化プロテオミクスによる細胞分化解析

使用单细胞磷酸蛋白质组学进行细胞分化分析

• 批准号: 22K14786
• 负责人: 日高 拓也
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K14786/
• 关键词: 1分子イメージング; リン酸化プロテオミクス; 光シート顕微鏡; 1細胞解析; 電気泳動; 1細胞プロテオミクス; 翻訳後修飾; 細胞分化

本研究では光シート顕微鏡 (PISA顕微鏡)による1分子観察をベースとした1細胞リン酸化プロテオミクス解析システムを開発し、中胚葉分化における1細胞リン酸化プロテオーム変化を捉えることを目的とする。2022年度はシステム開発に注力し、(1)ハイスループットな1細胞サンプル調製を可能にする微小液滴内抗体反応系の確立、(2)マイクロウェルゲルを用いた電気泳動分離、(3)光シート顕微鏡を用いた1分子イメージングと画像解析による超高感度定量の3つの技術要素に分割して進めた。しかし(1)(2)において、当初予定していたマイクロ流路デバイスを用いた液滴内抗体反応は抗体ビーズと一細胞の同時捕捉の効率が低く、またマイクロウェルゲルもサンプルロード時のビーズのロスが大きな問題となった。そこで液滴内反応からマルチウェルプレートベースの一細胞抗体反応に切り替え、電気泳動システムを改良することにより、スループット性を担保したままロスの少ない解析が見込めるようになった。この際使用する抗体ビーズはNHS活性化ビーズへ抗体をカップリングによって作製し、使用抗体の検討が完了している。(3)については泳動後のゲルを、ビーズ位置をもとに自動的に蛍光観察する顕微鏡システムを構築し、画像解析プログラムの開発にも着手した。また2023年度に予定している細胞分化実験に向けて、iPS細胞の中胚葉分化の予備実験を行い、実験系を確立した。

The purpose of this study is to detect the molecular weight of PISA microarray (microarray). This is the first step in the analysis of cellular acidification and mesoembryonic differentiation. In the year 2022, it is possible to establish the anti-antibody system in small droplets, (2) the separation of anti-antibodies in small droplets, (2) the separation of anti-antibodies in small droplets, (1) the detection of antibodies in small droplets, and (2) the separation of antibodies in small droplets. (3) the optical micrometer is used to analyze the ultra-high sensitivity quantitative analysis of the technical elements of the ultra-high sensitivity. At the same time, it is necessary to use the antibody in the droplet to reverse the antibody in the droplet. at the same time, it is necessary to capture the low temperature rate, the temperature response rate and the temperature difference between the two droplets. at the same time, the antibody in the droplet is used to reverse the antibody concentration. In the droplet, there was no significant difference between the two groups. In the droplet, the anti-cytopathic antibody was used to replace the antibody, the electrophoretic activity was used to improve the quality of the drug, and the drug was used to guarantee the safety of the drug. International use of antibodies, activation of NHS, antibodies, antibodies. (3) after swimming, there is an automatic light watch, a micro-camera, a portrait analysis and a hand-to-hand walk. In the year 2023, it is predicted that the cell differentiation will lead to the differentiation of the mesoderm and the mesoderm of the iPS cell.