Röntgenmikroskopische Analyse von Protein- und Nucleinsäureverteilungen in eukaryotischen Zellkernen und Chromosomen

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Im Rahmen des Vorhabens Ru 725/1-1 und /1-2 wurde die räumliche Verteilung des MSL-1 Proteins in den Kernen von Kulturzellen von Drosophila melanogaster im Licht- und Röntgenmikrokop untersucht. Dafür wurden verschiedene Förbeprotokolle entwickelt, nämlich ein Immunofluoreszenz Förbeprotokoll für die Lichtmikroskopie sowie ein modifiziertes Protokoll mit Gold gekoppeltem sekundären Antikörper mit anschließender Silberverstärkung für die Röntgenmikroskopie. Es konnte gezeigt werden, daß sich die im Konfokalen Laser Scanning Mikroskop relativ gleichmäßig gefärbten Gebiete im Röntgenmikroskop infolge der fünfmal höheren Auflösung in diskrete Untereinheiten auflösen lassen.Nach vorläufigen licht- und röntgenmikroskopischen Untersuchungen an Chironomus tentans wurde für Caenorhabditis elegans zur Darstellung eines HP1 Proteins im Röntgenmikroskop ein Fusionskonstrukt mit dem green fluorescent protein (GFP) hergestellt und als extrachromosomales Array in C-elegans stabil exprimiert.Mit dem verbesserten Röntgenmikroskop am BESSY II sollen die Untersuchungen mit höherer auflösung forgeführt werden. Es sollen Experimente zur Kolokalisation verschiedener Proteine sowie Experimente zum Immunolabeling durch Mikroinjektion in Zellkerne von Drosophila melanogaster durchgeführt werden.Zur Darstellung der Verteilung es cHP1.1 Proteins in vereinzelten Zellen von C. elegans mit dem Röntgenmikroskop soll die von S. Vogt für das MSL-1 Protein erarbeitete Methode übertragen werden.