Röntgenmikroskopische Analyse von Protein- und Nucleinsäureverteilungen in eukaryotischen Zellkernen und Chromosomen

X 射线显微镜分析真核细胞核和染色体中蛋白质和核酸的分布

• 批准号: 5115798
• 负责人: Dr. Dietbert Rudolph
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Biologie III
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1997-12-31 至 2000-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5115798?language=en
• 关键词: ntgenmikroskopische; Analyse; von; Protein; und

Im Rahmen des Vorhabens Ru 725/1-1 und /1-2 wurde die räumliche Verteilung des MSL-1 Proteins in den Kernen von Kulturzellen von Drosophila melanogaster im Licht- und Röntgenmikrokop untersucht. Dafür wurden verschiedene Förbeprotokolle entwickelt, nämlich ein Immunofluoreszenz Förbeprotokoll für die Lichtmikroskopie sowie ein modifiziertes Protokoll mit Gold gekoppeltem sekundären Antikörper mit anschließender Silberverstärkung für die Röntgenmikroskopie. Es konnte gezeigt werden, daß sich die im Konfokalen Laser Scanning Mikroskop relativ gleichmäßig gefärbten Gebiete im Röntgenmikroskop infolge der fünfmal höheren Auflösung in diskrete Untereinheiten auflösen lassen.Nach vorläufigen licht- und röntgenmikroskopischen Untersuchungen an Chironomus tentans wurde für Caenorhabditis elegans zur Darstellung eines HP1 Proteins im Röntgenmikroskop ein Fusionskonstrukt mit dem green fluorescent protein (GFP) hergestellt und als extrachromosomales Array in C-elegans stabil exprimiert.Mit dem verbesserten Röntgenmikroskop am BESSY II sollen die Untersuchungen mit höherer auflösung forgeführt werden. Es sollen Experimente zur Kolokalisation verschiedener Proteine sowie Experimente zum Immunolabeling durch Mikroinjektion in Zellkerne von Drosophila melanogaster durchgeführt werden.Zur Darstellung der Verteilung es cHP1.1 Proteins in vereinzelten Zellen von C. elegans mit dem Röntgenmikroskop soll die von S. Vogt für das MSL-1 Protein erarbeitete Methode übertragen werden.

通过对Ru 725/1-1和/1-2前体的研究，我们发现了MSL-1蛋白在果蝇体内的表达。Dafür wurden versedene Förbeprotokolle entwickelt，nämlich ein Immunofluoreszenz Förbeprotokoll für die Lichtmikroskopie sowie ein modifiziertes Protokoll mit Gold gekoppeltem sekundären Antikörper mit anschließender Silberverstärkung für die Röntgenmikroskopie. Es konnte gezeigt韦尔登，Dahlosich die im Konfokalen Laser Scanning Mikroskop relativ gleichmäßig gefärbten Gebiete im Röntgenmikroskop infolge der fünfmal höheren Auflösung in diskreinte Untereinheiten auflösen lassen.Nach vorläufigen licht- und röntgenmikroskopischen Untersuchungen an Chironomus tentans wurde für Cajobhabditis elegans zur Darstellung eines HP 1 Proteins im Röntgenmikroskop ein Fusionskonkt strukt dem绿色色荧光蛋白（GFP）hergestellt und als extrachromosomales Array in C-elegans stabil explanert.Mit dem verbesserten Röntgenmikroskop am BESSY II sollen die Untersuchungen mit höherer auflösung forgführt韦尔登.通过韦尔登体内微量注射法进行免疫标记的实验研究，证明了cHP 1.1蛋白在果蝇体内的特异性。优美的植物和来自S.沃格特für das MSL-1 Protein erarbeitete Method übertragen韦尔登。