Investigations into Pentachloropseudilin biosynthesis

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Das Phenylpyrrol-Derivat Pentachlorpseudilin wird von Actinoplanes sp. produziert. Über die Biosynthese ist bisher noch nichts bekannt. Für die Einführung der fünf Chloratome sind Hybridisierungsversuchen zufolge NADH-abhängige Halogenasen verantwortlich. Mit Hilfe eines Halogenase-Gens aus der Pyrrolnitrin-Biosynthese als Sonde soll eine Cosmid-Genbank des Produzenten gescreent werden. Die Insert-DNA positiver Klone soll subkloniert und sequenziert werden, wobei der Sequenzierung des Halogenase-Gens die erste Priorität gilt. Da zu erwarten ist, daß die Biosynthese-Gene geclustert vorliegen, könnte durch das Halogenase-Gen Zugang zu den anderen Biosynthese-Genen erhalten werden. Vorrangig soll die Frage beantwortet werden, ob für die Chlorierung des Pyrrolrings dasselbe Enzym verantwortlich ist, wie für die Chlorierung des Phenol-Teils. Durch Expression der Halogenase(n) in geeigneten Wirtsystemen soll die HalogenaseAktivität in vitro nachgewiesen und das (die) entsprechenden Enzym(e) gereinigt und charakterisiert werden. Es soll versucht werden, auf der Basis der Sequenz-Daten mit Hilfe von 'gene replacement' oder Ribozymen Mutanten zu erhalten, um die zum Biosynthese-Cluster gehörenden Gene zu identifizieren und somit die Voraussetzungen für die Aufklärung der Biosynthese zu schaffen.