Charakterisierung des Tryptophan-7-Halogenase-Systems

色氨酸 7-卤化酶系统的表征

• 批准号: 5283792
• 负责人: Professor Dr. Karl-Heinz van Pée
• 金额: --
• 依托单位: Professur für Technische Biochemie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1999-12-31 至 2008-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5283792?language=en
• 关键词: Charakterisierung; des; Tryptophan; Halogenase; Systems

Die Tryptophan-7-Halogenase katalysiert die regioselektive Chlorierung von Tryptophan in einer NADH/FAD-, sauerstoff- und chloridabhängigen Reaktion. Für diese Reaktion wird zusätzlich zur eigentlichen Halogenase noch eine Flavin-Reduktase als zweite Proteinkomponente benötigt. Entsprechendes sollte auch für die potentielle Tryptophan-6-Halogenase gelten, die nach Überexpression gereinigt werden sollt. Für die Charakterisierung der Halogenasen ist es notwendig, das optimale Verhältnis der beiden Proteinkomponenten zueinander und ihr Zusammenwirken detailliert zu untersuchen. Von Interesse ist der Einfluß der beiden Protein-Komponenten auf die Reaktion mit Sauerstoff und dessen Eintritt in das Enzymsystem. Die Frage nach der Beteiligung von Metallionen an der Reaktion soll ebenfalls geklärt werden. Des weiteren sollen die kinetischen Daten für die Reaktionen mit D- und L-Tryptophan, und den verschiedene Halogeniden bestimmt werden. Die Beteiligung von Histidin- und Tryptophan-Resten an der Reaktion soll durch biochemische und molekulargenetische Methoden untersucht werden. Mit Hilfe anderer Nukleophile als Chlorid und der Verwendung entsprechend substituierter Tryptophananaloga soll versucht werden, Zwischenstufe der Reaktion zu erhalten.

色氨酸-7-卤代酶在NADH/FAD-、sauerstoff-和chloridabhängigen反应中催化色氨酸的区域选择性氯化。对于这种反应，我们需要一种黄素还原酶作为两种蛋白质组分。Entsprechendes sollte auch für die potentielle Tryptophan-6-Halogenase gelten，die nach Überexpression gereinigt韦尔登sollt.对于Halogenasen的特性，最佳的方法是使用蛋白质组分，并对其进行详细说明。在酶系统中，蛋白质组分对Sauerstoff和Dessen Eintritt反应的影响。在对金属进行焊接时，反应会变得韦尔登。Des weiteren sollen die kinetischen Daten für die Reaktionen mit D-和L-色氨酸，和该versedene卤素bestimmt韦尔登。组氨酸与色氨酸的相互作用及其与生物化学和分子遗传学方法的反应可通过韦尔登进行。通过氯化物和亲核试剂对色氨酸类似物进行预取代，使其韦尔登溶解，从而提高反应的稳定性。