Charakterisierung des Tryptophan-7-Halogenase-Systems

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Die Tryptophan-7-Halogenase katalysiert die regioselektive Chlorierung von Tryptophan in einer NADH/FAD-, sauerstoff- und chloridabhängigen Reaktion. Für diese Reaktion wird zusätzlich zur eigentlichen Halogenase noch eine Flavin-Reduktase als zweite Proteinkomponente benötigt. Entsprechendes sollte auch für die potentielle Tryptophan-6-Halogenase gelten, die nach Überexpression gereinigt werden sollt. Für die Charakterisierung der Halogenasen ist es notwendig, das optimale Verhältnis der beiden Proteinkomponenten zueinander und ihr Zusammenwirken detailliert zu untersuchen. Von Interesse ist der Einfluß der beiden Protein-Komponenten auf die Reaktion mit Sauerstoff und dessen Eintritt in das Enzymsystem. Die Frage nach der Beteiligung von Metallionen an der Reaktion soll ebenfalls geklärt werden. Des weiteren sollen die kinetischen Daten für die Reaktionen mit D- und L-Tryptophan, und den verschiedene Halogeniden bestimmt werden. Die Beteiligung von Histidin- und Tryptophan-Resten an der Reaktion soll durch biochemische und molekulargenetische Methoden untersucht werden. Mit Hilfe anderer Nukleophile als Chlorid und der Verwendung entsprechend substituierter Tryptophananaloga soll versucht werden, Zwischenstufe der Reaktion zu erhalten.