Involvement of a halogenase in a non-heme-haloxidase in the biosynthesis of balhimycin

非血红素卤氧化酶中的卤化酶参与巴希霉素的生物合成

• 批准号: 5225014
• 负责人: Professor Dr. Karl-Heinz van Pée
• 金额: --
• 依托单位: Professur für Technische Biochemie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1998-12-31 至 2005-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5225014?language=en
• 关键词: Involvement; halogenase; non; heme; haloxidase

Im Gencluster für die Balhimycin-Biosynthese wurden Gene für eine NADH-abhängige Halogenase und eine "Nicht-Häm-Haloperoxidase" gefunden. Durch Untersuchungen der Substratspezifität soll ein leicht zugängliches Substrat für die NADH-abhängige Halogenase gefunden und darauf aufbauend ein Reinigungsverfahren entwickelt und das Enzym bezüglich seiner molekularen und kinetischen Eigenschaften charakterisiert werden. Nach Subklonierung des "Haloperoxidase"-Gens und Überexpression soll die "Haloperoxidase" gereinigt und anschließend charakterisiert werden. Das gereinigte Enzym soll mit bereits bekannten "Nicht-Häm-Haloperoxidasen" verglichen werden. Durch Einbringen des "Haloperoxidase"-Gens aus Streptomyces aureofaciens oder S. lividans in eine Mutante des Balhimycin-Produzenten, die keine aktive "Haloperoxidase" mehr produziert, soll geprüft werden, ob diese die entsprechende Funktion übernehmen können. Mit Hilfe einer entsprechenden Deletionsmutante soll die Rolle der "Nicht-Häm-Haloperoxidase" in der Balhimycin-Biosynthese untersucht und aufgeklärt werden, welche Substrate von den Nicht-Häm-Haloperoxidasen akzeptiert werden; hierbei könnten entscheidende Hinweise auf die allgemeine biologische Funktion dieser Enzyme erhalten werden.

在Balhimycin生物合成的基因组中发现了一个NADH-脱卤酶基因和一个“非卤过氧化物酶”基因。确定底物特异性的方法是用一种适合于NADH-结合型卤代酶的底物，并使其具有一种增强的酶活性，使酶的分子量和动力学特征韦尔登。通过对“卤过氧化物酶”基因的亚克隆和超表达，可以获得“卤过氧化物酶”的韦尔登。这种酶的产生是由于“非卤代过氧化物酶”的存在而导致韦尔登。“卤过氧化物酶”的产生菌-金色链霉菌或S.在Balhimycin-产品突变体中，没有活性的“卤过氧化物酶”梅尔产生，因此韦尔登，或通过这种功能增强。通过对“非卤代过氧化物酶”在Balhimycin生物合成中的作用的研究，我们发现了非卤代过氧化物酶的底物;因此，我们发现了酶的一般生物学功能。