Untersuchungen zum Wirkungsmechanismus der GPI-spezifischen Phospholipase D aus Humanserum

人血清 GPI 特异性磷脂酶 D 作用机制的研究

• 批准号: 5167426
• 负责人: Privatdozentin Dr. Heidrun Rhode
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Biochemie I
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1998-12-31 至 2001-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5167426?language=en
• 关键词: Untersuchungen; zum; Wirkungsmechanismus; der; GPI

Die glycosylphosphatidylinositol-(GPI)-spezifische Phospholipase D soll aus humanem Serum erstmalig in mg-Mengen für eine umfassende Charakterisierung gereinigt werden. Neben der Bestimmung der basalen Charakteristika ist zu prüfen, ob die Inaktivität des Enzyms gegenüber nativen GPI-Proteinen im Serum und der Zellmembran durch eine Hemmung durch natürlich vorkommende Phospholipide zustande kommt. Das gereinigte Enzym ist hinsichtlich seiner Substratspezifität mit verschiedenen unterschiedlichen hydrophoben GPI-Alkalische Phosphatose-Spezies und verschiedenen Phospholipiden zu untersuchen. Es ist zu untersuchen, ob die Butanolaktivierung des Enzyms durch Transphosphatidylierung zustande kommt. Die in der Literatur widersprüchlich beschriebene Interaktion mit Serumlipoproteinfraktionen ist mit dem reinen Enzym aufzuklären. Es ist ein kinetisches Modell zu erarbeiten, das die ternären Interaktionen: hydrophobes GPI-Substrat, hydrophobes Enzym und Detergenz unter Einbeziehung physiologischer Amphiphile erklärt. Es ist zu untersuchen, ob die aus der Primärstruktur zu erwartenden zehn potentiellen Glykosylierungsstellen realisiert sind. Darüber hinaus ist das Glykolysierungsmuster mit MALDI-MS und Dionex-Chromatographie nach proteolytischer Spaltung des Enzyms zu untersuchen. Es ist nach molekularen Hinweisen für den Transport des Enzyms in die Lysosomen zu suchen.

人血清中糖基磷脂酰肌醇-（GPI）-特异性磷脂酶D的测定可用于确定韦尔登的特性。通过测定血清和细胞膜中天然GPI-蛋白酶的活性，可以确定基础特性。Das geneinigte Enzymes ist hinsichtlich seiner Substratspezifität mit versatiedenen unterschedichen hydrophoben GPI-Alkalische Phosphatose-Spezies and versatiedenen Phospholipiden zu untersuchen.这是为了了解如何通过转磷酸酶来进行丁醇活化。Die in der Literatur widersprüchlich beschriebene Interaktion mit Serumlipoproteinfraktionen ist mit dem reinen Enzyme aufzuklären. Es ist ein kinetisches Model zu erarbeiten，das die ternären Interaktionen：hydrophobes GPI-Substrat，hydrophobes Enzym und Detergenz unter Einbeziehung physiologischer Amphiphile erklärt.这是一个很好的方法，通过基本结构来实现潜在的糖基化。本文介绍了利用MALDI-MS和Dionex-色谱法对酶的蛋白水解进行糖水解的方法。这是一个分子Hinweisen为运输酶在溶酶体zu suchen。