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原核細胞でも機能する真核細胞由来のプロモーターの発現調製機構の解析

原核细胞中也发挥作用的真核启动子的表达调控机制分析

基本信息

批准号：
08760077
负责人：
跡見晴幸
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760077/
关键词：
isocitrate lyase glucose repression yeast mitochondria transcription

项目摘要

本研究において達成できた成果は以下の通りである。1。Candida tropicalisのイソクエン酸リアーゼ遺伝子の5'-上流領域(UPR-ICL)のcisacting elementの同定。以前に、UPR-ICL上で酵母Saccharomyces cerevisiae内で機能するproA領域と大腸菌Escherichia coli内で機能するproBとを同定した。本研究では新たに、S.cerevisiae内でUPR-ICL上の2つの領域(region A1,-728 to-569;region A2,-370 to-356)が酢酸培養時に転写活性化能を有すること、それらが独立した情報伝達系によって制御されていることが明らかになった。特に、region Alを支配する情報伝達系(Snflp依存型、Cat8p非依存型、Miglp依存型)はS.cerevisiae内で未だに同定されていない新規な経路である可能性がある。また、UPR-ICL と同様な遺伝子発現能を有するリンゴ酸シンターゼ遺伝子の5'-上流領域についても同様な解析を行ったが、これもSnflp依存型、Miglp依存型であったが、意外なことに、global transcriptional activator の1つであるRaplpの関与が示唆され、UPR-ICLとは異なった調節機構に支配されていることがわかった。2。Candida tropicalisのイソクエン酸リアーゼ遺伝子の5'-上流領域(UPR-ICL)を制御する細胞内調節因子の同定。invivoのアプローチを用いて、UPR-ICL-LacZ融合遺伝子を利用することにより、S.cerevisiae内でUPR-ICLが機能しない単一変異株の取得およびその相補遺伝子(FIL1,Factor for Isocitrate Lyase Induction 1)の単離に成功した。構造解析の結果、その遺伝子は原核細胞でしか同定されていなかったribosome releasing factor(RRF)と高い相同性を示した。N末端領域が他のすべてのRRRFより突出していたことから、それがミトコンドリアに局在することが予想され、実験的に証明された。また、△fill破壊株ではミトコンドリア内のタンパク合成が異常であること、その異常がrho^0株やミトコンドリアのタンパク合成を特異的の阻害するクロラムフェニコールで処理した細胞でみられる異常と類似していたことを見いだした。さらに、△fill破壊株ではS.cerevisiaeに内在するICL1、FBP1などのグリオキシル酸回路や糖新生系酵素の遺伝子発現が特異的に抑制されていることも明らかとなった。これらのことから、glucose repressionによって発現が抑制されているいくつかの遺伝子の抑制解除にはミトコンドリアの正常な機能が必須であることが明らかになった。

The results of this study are as follows: 1。Identification of Candida tropicalis 5'-upper flow domain (UPR-ICL) cisacting element In the past, UPR-ICL has the same function in Saccharomyces cerevisiae and Escherichia coli. In this study, two regions (region A1,-728 to-569;region A2,-370 to-356) of UPR-ICL were identified in S.cerevisiae. Special, region Al dominated information transmission system (Snflp dependent, Cat 8p independent, Miglp dependent) within S.cerevisiae is not divided into the same set of new rules, the possibility of the new rule is also discussed. UPR-ICL and IPL have the ability to generate IPL, IPL, 2。Identification of intracellular regulatory factors in the regulation of Candida tropicalis by 5'-up-stream domain (UPR-ICL) With the use of invivo's Aprologi and the utilization of the UPR-ICL-LacZ fusion gene, UPR-ICL has been successfully used in S.cerevisiae to obtain a single variant and a single complementary gene (FIL1,Factor for Isocitrate Lyase Induction 1). The results of structural analysis show that the ribosome releasing factor(RRF) has high identity with prokaryotic cells. The N-terminal domain is a domain of RRRF. It is a domain of RRF. In addition, it is necessary to prevent the occurrence of abnormal phenomena in the cell. In addition, the gene expression of S. cerevisae in the protein ICL1 and FBP1 was specifically inhibited in the acid loop and in the gene expression of glycogen-producing enzymes. This is the first time that a person's glucose resistance has been detected.