レトロウイルスペクターを用いた遺伝子導入軟骨細胞組織による軟骨修復の可能性

使用逆转录病毒载体进行基因转移软骨细胞组织修复软骨的可能性

• 批准号: 08877230
• 负责人: 石黒 直樹
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877230/
• 关键词: gene transfection; NF-κB; AP-1; glutathion peroxidase; Iiposome

カチオンリポソームを使用してベクターにGlutathion peroxidaseのDNAを組み込み、培養ヒト滑膜細胞、ヒト由来軟骨系細胞に対してヒトGlutathion peroxidaseのDNAを遺伝子導入し、発現させた細胞株を作成、選択倍地にて培養、発現細胞株のみを採取した。さらに遺伝子導入させたヒトGlutathion peroxidaseの発現はwestern blotと酵素活性で確認した。これら細胞にIL-1,TNF刺激下にNF-κBの二つの転写因子に注目してGel shift Assayを行いこれら転写因子の阻害が起こっていることを確認した。またAP-1 shiteまたはNF-κB siteの下流にある遺伝子(IL-8,MMP-1,MCP-1)注目してこれらのmRNA発現の抑制をNorthern Blotにより確認した。この事は転写因子の転写活性が抗酸化酵素の導入により阻害されたことを示し、目的の細胞を作り出した事を証明する。現在これらのデータを纏めて投稿すべく、論文作成中である。

The DNA of Glutathion Peroxidase was assembled, cultured and introduced into chondrocytes, and cell lines were developed. The expression of Glutathion peroxidase was confirmed by western blot and enzyme activity. Gel shift Assay was performed to confirm the inhibition of NF-κB by IL-1 and TNF stimulation. Northern Blot analysis confirmed that AP-1 shite inhibited mRNA expression downstream of NF-κB site, which was observed in IL-8,MMP-1,MCP-1. This activity is demonstrated by the inhibition of the introduction of anti-acidifying enzymes and the production of target cells. Now, I'm writing a paper.