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軟骨細胞の代謝に対する各種薬剤の影響の検討―スクリーニングシステムの構築―

检查各种药物对软骨细胞代谢的影响 - 筛选系统的构建 -

基本信息

批准号：
20659230
负责人：
石黒直樹
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

sox9遺伝子のプロモーターのNCBIのデータベースから得たシークエンス情報を元にレポーター遺伝子を作成した。恒常的にsox9遺伝子が発現し、SOX9蛋白が合成されている事を確認した細胞株(HCS2/8)にウイルスベクターを用いてレポーター遺伝子を導入し、発現細胞を作成した。Sox9レポーター遺伝子導入発現細胞株において、導入前と変化無くsox9遺伝子が発現されている事を確認した。この細胞を用いて約2000種の薬物についてsox9遺伝子の発現に与える影響を調べた。このスクリーニングデータを基に発現量増強に働く薬剤を数種類選別した。これら薬剤についてHCS2/8、ヒト軟骨細胞において同様にsox9発現増強効果が認められた候補物質を数種類選別した。さらにSOX9の標的遺伝子であるType II collagen, Proteoglycan遺伝子についてmRNA発現量の変化をPCRで確認した。同時にWestern blotにてタンパク量の変化を確認した。これらスクリーニングデータを基に最終的に標的遺伝子の発現量を増加させた化合物2種類を選定した。これら化合物は共にSOX9の発現量を増加させると共にその下流にあると考えられるプロテオグリカン、type II collagenのmRNA発現、蛋白合成も増加させた。OA軟骨組織器官培養系において確認する必要がある。今後これら化合物については自然発症OA動物モデルなどで効果を確認する必要がある。これら物質は変形性関節症を始めとする各種関節症疾患の治療薬開発の糸口を提供する可能性がある。更に、骨折治癒過程が内軟骨性骨化によることを考えれば、骨折治癒促進作用についても十分に期待できる薬剤であると考えている。

sox9弝子のプロモーターのNCBIのデータベースからGet the たシークエンスinformation を元にレポーター伝子を成した. The constant sox9 remains and the sox9 protein is synthesized and the sox9 protein is synthesized and the cell line is confirmed (H CS2/8) The にウイルスベクターを is made using the いてレポーター缝子を introduction and the 発appears the cells. Sox9 レポーター缝子 was introduced into the cell line and the cell line was confirmed. Before the introduction, the sox9 レポーター缝子 was introduced and the cell line was confirmed. About 2000 kinds of の薬物についてsox9 are used in the cell いて and the える influence is adjusted. The このスクリーニングデータをbase is now enhanced and the number of categories is increased.これら薬剤についてHCS2/8、ヒト軟骨細胞において同様にsox9発現増強効果が認められた候補物質を数種類選別した。 The SOX9-labeled Type II collagen, Proteoglycan-derived mRNA, and the current amount of the mRNA were confirmed by PCR. At the same time, the amount of Western blot was changed and confirmed. The final target of the これらスクリーニングデータをbase is selected as the remaining 2 types of にれらスククリーニングデーに. Type II The expression of collagen mRNA and protein synthesis are increased. The OA Cartilage Tissue and Organ Culture Department confirms that it is necessary. From now on, it is necessary to confirm the effect of the natural hysteritis OA animal compound in the future. This material is used to treat deformity joint disease and various joint diseases, and it is possible to treat various joint diseases. More information, the process of fracture healing includes endochondral ossification, and the fracture healing promotion effect is very promising.