種特異的プリオン蛋白結合因子の同定

物种特异性朊病毒蛋白结合因子的鉴定

• 批准号: 08878139
• 负责人: 北本 哲之
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08878139/
• 关键词: プリオン蛋白; プリオン蛋白結合因子; two hybrid system

クロイツフェルト・ヤコブ病(CJD)の原因因子としてプリオン仮説が提唱されている。プリオン病の種間のバリヤ-を構成する因子として、従来はプリオン蛋白の一次構造こそが主な構成成分と考えられていたが、ヒト型プリオン蛋白よりも、C末端をマウスプリオン蛋白に変更したキメラ型プリオン蛋白の方が感染実験に適することが知られるようになり、プリオン蛋白結合因子の存在が示唆されるようになってきた。そこで、酵母を用いたTwo hybrid systemにより、プリオン蛋白の結合因子を同定することを本研究の目的とした。ヒトおよびマウスのプリオン蛋白遺伝子を、PGBTプラスミドにクローニングし、PGADプラスミドベクターに入った_cDNAライブラリーと同時に酵母入に導入し、ヒスチジンによる選択をかけて、陽性のクローンを検索した。その結合、マウスの_cDNAライブラリーより2種類のクローンを、ヒト_CDNAライブラリーより1種類のクローンを同定している。現在は、それぞれのクローンを用いて、完全長の_CDNAのクローニングおよびゲノムDNAのクローニングを行っている。プリオン蛋白の結合因子が、プリオン蛋白異常化の因子となるかどうかは、それぞれの結合因子のノックアウトモデルを作製し、感染実験で証明することが必要である。本萌芽的研究では、プリオン蛋白の異常化のメカニズムの解明に関して、まさにその糸口となる蛋白分子の同定を行い得た。今後のノックアウト・モデルおよび、結合因子のヒト化マウスモデルの作製と進展すべき研究である。

ク ロ イ ツ フ ェ ル ト · ヤ コ ブ disease (CJD) の reason factor と し て プ リ オ ン 仮 says the が sing さ れ て い る. プ リ オ ン disease の interspecific の バ リ ヤ - を constitute す る factor と し て, 従 は プ リ オ ン protein の a tectonic こ そ が main な composition と exam え ら れ て い た が, ヒ ト type プ リ オ ン protein よ り も, C terminal を マ ウ ス プ リ オ ン protein に - more し た キ メ ラ type プ リ オ ン protein の party が infection be 験 に optimum す る こ と が know ら れ る よ う に な The presence of が indicates されるようになって た た. そ こ で, yeast を い た Two hybrid system に よ り, プ リ オ ン protein の combined with fixed factor を す る こ と を の purpose this study と し た. ヒ ト お よ び マ ウ ス の プ リ オ ン protein heritage 伝 を, PGBT プ ラ ス ミ ド に ク ロ ー ニ ン グ し, PGAD プ ラ ス ミ ド ベ ク タ ー に into っ た _cDNA ラ イ ブ ラ リ ー と に yeast into に import し, at the same time ヒ ス チ ジ ン に よ る sentaku を か け て, positive の ク ロ ー ン を 検 cable し た. そ の combination, マ ウ ス の _cDNA ラ イ ブ ラ リ ー よ り 2 kinds の ク ロ ー ン を, ヒ ト _cDNA ラ イ ブ ラ リ ー よ り 1 species の ク ロ ー ン を with fixed し て い る. Now は, そ れ ぞ れ の ク ロ ー ン を with い て, long completely の _CDNA の ク ロ ー ニ ン グ お よ び ゲ ノ ム DNA の ク ロ ー ニ ン グ を line っ て い る. プ リ オ ン protein の combination factor が, プ リ オ ン protein abnormal の factor と な る か ど う か は, そ れ ぞ れ の combination factor の ノ ッ ク ア ウ ト モ デ ル を cropping し, infection be 験 で prove す る こ と が necessary で あ る. This budding research で は, プ リ オ ン protein の abnormal の メ カ ニ ズ ム の interpret に masato し て, ま さ に そ の si mouth と な る の protein molecules with fixed line を い た. Future の ノ ッ ク ア ウ ト · モ デ ル お よ び, combined with factor の ヒ ト change マ ウ ス モ デ ル の cropping と progress す べ き research で あ る.

项目成果

Kitamoto T, Tateishi J.: "Human prion disease and human prion protein disease" Curr. Topics Microbiol. Immunol.207. 27-34 (1996)

Kitamoto T，Tateishi J.：“人类朊病毒病和人类朊病毒蛋白病”Curr。

Nagayama M, Shinohara Y, Furukawa H, Kitamoto T.: "Fatal familial insomnia with a mutation at codon 178 of the prion protein gene; First report from Japan" Neurology. 47. 1313-1316 (1996)

Nagayama M、Shinohara Y、Furukawa H、Kitamoto T.：“朊病毒蛋白基因密码子 178 处发生突变的致命家族性失眠；来自日本的第一份报告”神经病学。

Kitamoto T, Nakamura K, Nakao K, Shibuya S, Shin R-W, Gondo Y, Katsuki M, Tateishi J.: "Humanized prion protein knock-in by Cre-inducedsite-specific recombination in the mouse" Biochem. Biophys. Res. Commun.222. 742-747 (1996)

Kitamoto T、Nakamura K、Nakao K、Shibuya S、Shin R-W、Gondo Y、Katsuki M、Tateishi J.：“通过 Cre 诱导的小鼠位点特异性重组实现人源化朊病毒蛋白敲入”Biochem。

Hoque MZ, Kitamoto T, Furukawa H,Muramoto T, Tateishi J.: "Mutation inthe prion protein gene at codon 232 in Japanese patients with Creutzfeldt-Jakob disease; A clinicopathological, immunohistochemical and transmission study" Acta Neuropathol.92. 441-446

Hoque MZ、Kitamoto T、Furukawa H、Muramoto T、Tateishi J.：“日本克雅氏病患者中密码子 232 处的朊病毒蛋白基因突变；临床病理学、免疫组织化学和传播研究”Acta Neuropathol.92。

Ghetti B, Piccardo P, Spillantini M,Ichimiya Y, Porro M, Perini F, Kitamoto T, Tateishi J, Seiler C, Frangione B, Bugiani O, Giaccone G, Prelli F, Goedert M, Dlouhy SR, Tagliavini F.: "Vascular variant of prionprotein cerebral amyloidosis with tau-positiv

Ghetti B, Piccardo P, Spillantini M,Ichimiya Y, Porro M, Perini F, Kitamoto T, Tateishi J, Seiler C, Frangione B, Bugiani O, Giaccone G, Prelli F, Goedert M, Dlouhy SR, Tagliavini F.：“