ヒトプリオン蛋白過剰発現モデルの確立

人朊病毒蛋白过表达模型的建立

• 批准号: 07680822
• 负责人: 北本 哲之
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07680822/
• 关键词: プリオン; クロイツフェルト・ヤコブ病; 遺伝子置換; トランスジェニック

家族性クロイツフェルト・ヤコブ病(以下CJDと略)やゲルストマン・ストロイスラ-症候群のプリオン蛋白遺伝子に点変異が存在することが知られるようになってから、今までのマウスへの伝播実験で得られる実験動物では、モデル動物として不十分であることが明らかとなってきた。この不十分さを補うために、本研究ではプリオン病(特に点変異を有する)のマウスモデルの作製を主目的とした。まず、正常なプリオン蛋白の発現をめざして、ES細胞を用いてマウスからヒトへの遺伝子置換を行った。loxpの間にneo遺伝子とgpt遺伝子をはさむヒト型のプリオン蛋白遺伝子をES細胞に導入し、homologous recombinationを確認後、germ-line化し、ヘテロのマウスの受精卵にCre recombinaseを導入し、完全な形の遺伝子置換に成功した。この方法により、ヒト型プリオン蛋白が、マウスのプリオン蛋白と同様の発現分布および発現量が得られることが期待できる。次にプリオン蛋白遺伝子の過剰発現の系として、トランスジェニックのシステムを利用した。マウスのプリオン蛋白遺伝子のプロモーター領域、exon1,exon2をクローニングし、20kbpにおよぶintron2をBgl IIとBamH I間で欠失させたトランスジーンを準備し、マウスの卵に導入した。F1 マウスのDNA解析にて、11匹中2匹にトランスジーンを確認し、現在はトランスジーンのホモ化を行っている。上記のように、予定していた過剰発現、および正常発現のヒト化マウスの作製の系は本研究の期間内に終了することが出来た。今後は、この系を使用して、さらに多くの変異マウスを作製するとともに、作製したマウスを用いて伝播実験を行う予定である。また、intron 2の欠失のないトランスジーンの作製にも成功しており、より自然な遺伝子を用いて過剰発現の系を得ることが可能となった。

Familial disease (hereinafter referred to as CJD) disease・ストロイスラ-SYNDROME SYNDROME知られるようになってから、Now this is the best The animals are the same, and the animals are the same as the animals. The main purpose of this study is to make the disease that is not very good and to make up for it.まず, normal なプリオンprotein の発成をめざして, ES cells をいてマウスからヒトへの缝子 replaced を行った. loxpの间にneo伝子とgpt伝子をはさむヒトTYPEのプリオンprotein remaining伝子をES cellに Importし、homologous After the recombination is confirmed, the germ-line transformation is completed, the fertilized egg is imported, the fertilized egg is introduced, and the complete replacement of the fertilized egg is successful. How to use it? White と Same 様 の発 present distribution お よ 発 现quantity が got ら れ る こ と が expectation で き る. The use of にプリオンprotein 伝子の过剰発appears の system として, トランスジェニックのシステムを した.マウスのプリオンprotein remaining 伝子のプロモーターfield, exon1, exon2をクローニングし, 20kbpにおよぶintron2をBgl II と BamH I で owed loss さ せ た ト ラ ン ス ジ ー ン を preparation し, マ ウ ス の ov に introduction し た. F1 マウスのDNA analysisにて, 2 out of 11 にトランスジーンをconfirmedし, and now はトランスジーンのホモ化を行っている. The above records are the same as the original one, the predetermined one is the same as the normal one, and the normal one is the normal one. The system is made and the system is finished within the period of this study. From now on, we will use して, さらに多くの変different マウスを to make するとともに, make the したマウスを use the いて伝 Broadcast 実験を行うYi determined である.また、intron 2の无码のないトランスジーンの成にも成しており、よりNaturally, it is possible to use いて, and it is possible to use 剰発appears.

项目成果

Oda T, Kitamoto T, Tateishi J. Mitsuhashi T, Iwabuchi K, Haga C, Oguni E, Kato Y, Tominaga I, Yanai K, Kashima H, Kokure T, Hori K, Ogino K.: "Prion disease with 144 basepair insertion in a Japanese family line" Acta Neuropathol. 90. 80-86 (1995)

Oda T、Kitamoto T、Tateishi J. Mitsuhashi T、Iwabuchi K、Haga C、Oguni E、Kato Y、Tominaga I、Yanai K、Kashima H、Kokure T、Hori K、Ogino K.：“具有 144 个碱基对插入的朊病毒病

Tateishi J, Brown P, Kitamoto T, Hoque ZM, Roos R, Wollman R, Cervenakova L, Gajdusek DC.: "First experimental transmission of fatal familial insomnia." Nature. 376. 434-435 (1995)

Tateishi J、Brown P、Kitamoto T、Hoque ZM、Roos R、Wollman R、Cervenakova L、Gajdusek DC.：“致命性家族性失眠的首次实验性传播。”

Nakagawa Y, Kitamoto T, Furukawa H, Ogomori K, Tateishi J.: "Apo E in Creutzfeldt-Jakob disease." Lancet. 345. 68- (1995)

Nakakawa Y、Kitamoto T、Furukawa H、Ogomori K、Tateishi J.：“克雅氏病中的 Apo E”。

Tateishi J, Kitamoto T.: "Inherited prion diseases and transmission to rodents." Brain Pathol.5. 53-59 (1995)

Tateishi J，Kitamoto T.：“遗传性朊病毒疾病及其传播给啮齿类动物。”

Furukawa H, Kitamoto T, Tanaka Y, Tateishi J.: "New variant prion protein in a Japanese family with Gerstmann-Straussler syndrome." Mol.Brain Res.30. 385-388 (1995)

Furukawa H、Kitamoto T、Tanaka Y、Tateishi J.：“患有格斯特曼-施特劳斯勒综合征的日本家族中的新变异朊病毒蛋白。”