プリオン蛋白特異的モノクローナル抗体を用いたプリオン病の血清学的診断方法の確立

利用朊病毒蛋白特异性单克隆抗体建立朊病毒病血清学诊断方法

• 批准号: 12877052
• 负责人: 北本 哲之
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12877052/
• 关键词: プリオン蛋白; 可溶性プリオン蛋白; ノックアウトマウス; モノクローナル抗体; ELIZA法; ELISA法

プリオン蛋白の高いイムノアッセイ法の確立を目指して、本研究期間内に開発した可溶性プリオン蛋白とそれによって作成したモノクローナル抗体を用いて、ELIZAのアッセイ方法を開発した。このアッセイ系の有用性を確かめるために、神経芽細胞に強制発現させたヒト型プリオン蛋白をホスホリパーゼ処理によって培養液中に遊離させたサンプルと発現させていない陰性コントロールサンプルを比較して測定した結果、このELIZA系では十分な感度でヒト型プリオン蛋白を測定できることが明らかとなった。さらにこのELIZA系を用いて実際にヒト血漿中のプリオン蛋白の濃度を検討した結果、陽性と判断されるサンプルがクロイツフェルト・ヤコブ病の患者のなかで見つかった。しかしながら、陽性率は高いものでなく、また正常人のなかにも陽性と判断される例も明らかになったことより、このELIZA系だけでクロイツフェルト・ヤコブ病の診断をするにはいまだ困難であると考えた。もちろんプロテアーゼ処理後のサンプルでは、陽性反応は弱まり、当初予想していたようにプロテアーゼ抵抗性の前にはプロテアーゼ感受性の異常プリオン蛋白が存在し、このプロテアーゼの感受性によって正常型プリオン蛋白との鑑別が困難であることが明らかになった。正常型プリオン蛋白とプロテアーゼ感受性の異常プリオン蛋白を量的な区別だけでは診断法として無理であったのである。異常プリオン蛋白の構造のみを認識するモノクローナル抗体の必要性が確認でき、プリオン蛋白のノックアウトマウスに異常型プリオン蛋白を直接接種し、異常プリオン蛋白の変性前と変性後の免疫反応性で構造特異的な抗体のスクリーニングへと繋がりさらなる研究の方向が明らかとなった。

The aim of this study was to establish a method for the identification of soluble proteins and to develop a method for the identification of ELIZA antibodies during the study period. The results of this study were compared with those of the control group and the control group. In addition, ELIZA is used to detect the concentration of protein in plasma. The results show that ELIZA is positive and can be used to detect the concentration of protein in plasma. The positive rate of ELIZA was higher than that of normal people. The diagnosis of ELIZA was difficult. After the treatment, the positive reaction was weak, and the resistance was weak. The sensitivity of the abnormal protein was difficult to identify. The difference between normal and abnormal protein levels is diagnostic. The necessity of antibody against abnormal protein is confirmed, and the research direction of abnormal protein is clarified.

项目成果

田中智之, 北元憲利, 村本 環, 藤井秀治, 坂本晴彦, 吉田宗平, 辻 力, 北本哲之: "ヒト型プリオン蛋白のコドン219 polymorphismを認識する新しい単クローン抗体の作製-その診断的価値-"臨床と病理. 19 no.1. 91-93 (2001)

Tomoyuki Tanaka、Noritoshi Kitamoto、Tamaki Muramoto、Hideharu Fujii、Haruhiko Sakamoto、Sohei Yoshida、Chikara Tsuji、Tetsuyuki Kitamoto：“创建一种可识别人朊病毒蛋白密码子 219 多态性的新型单克隆抗体 - 其诊断价值 -”临床和病理学。 19第1期。91-93（2001）

Muramoto T,Tanaka T,Kitamoto N,Sano C,Hayashi Y,Kutomi T,Yutani C,Kitamoto T: "Analyses of Gerstmann-Straussler syndrome with 102Leu219Lys using monoclonal antibodies that specifically detect human prion protein with 219Glu"Neurosci Lett.. 288(3). 179-82

Muramoto T、Tanaka T、Kitamoto N、Sano C、Hayashi Y、Kutomi T、Yutani C、Kitamoto T：“使用用 219Glu 特异性检测人朊病毒蛋白的单克隆抗体对 102Leu219Lys 的 Gerstmann-Straussler 综合征进行分析”Neurosci Lett.. 288

Ishida C, Kakishima A, Okino S, Furukawa Y, Kano M, Oda Y, Nakanishi I, Makifuchi T, Kitamoto T, Yamada M.: "Sporadic Creutzfeldt-Jakob disease with MM1-type prion protein and plaques"Neurology. 60. 514-517 (2003)

Ishida C、Kakishima A、Okino S、Furukawa Y、Kano M、Oda Y、Nakanishi I、Makifuchi T、Kitamoto T、Yamada M.：“伴有 MM1 型朊病毒蛋白和斑块的散发性克雅氏病”神经病学。

Ishizawa K, Komori T, Shimazu T, Yamamoto T, Kitamoto T, Shimazu K, Hirose T.: "Hyperphosphorylated tau deposition parallels prion protein burden in a case of Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome P 102L mutation complicated with dementia"Acta Neuropath

Ishizawa K、Komori T、Shimazu T、Yamamoto T、Kitamoto T、Shimazu K、Hirose T.：“在 Gerstmann-Straussler-Scheinker 综合征 P 102L 突变并发痴呆的病例中，过度磷酸化 tau 沉积与朊病毒蛋白负荷相似”Acta Neuropath

Mariko Yamashita, Toru Yamamoto, Kazuto Nishinaka, Fukashi Udaka, Masakuni Kameyama, Tetsuyuki Kitamoto: "Severe brain atrophy in a case of thalamic variant of sporadic CJD with plaque-like PrP deposition"Neuropathology. 21. 138-143 (2001)

Mariko Yamashita、Toru Yamamoto、Kazuto Nishinaka、Fukashi Udaka、Masakuni Kameyama、Tetsuyuki Kitamoto：“散发性克雅氏病丘脑变异型伴有斑块状 PrP 沉积的严重脑萎缩”神经病理学。