家族制アルツハイマー病原因遺伝子presenilin-1結合因子の探索

寻找 presenilin-1 结合因子，一种导致家族性阿尔茨海默病的基因

• 批准号: 09878174
• 负责人: 北本 哲之
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09878174/
• 关键词: アルツハイマー病; プレセニリン1; yeast two hybrid system; トランスジェニックマウス

早期発症型家族性アルツハイマー病の原因遺伝子として新しく同定されたプレセニン1(PS1)の生物学的機能の解明を目的に、Yeast two hybrid systemを用いてヒト脳cDNAライブラリーよりPS1と結合する因子をスクリーニングした。PS1は、7つの疎水性膜貫通領域を有する膜蛋白で、第6(TM6)と第7番目(TM7)の膜貫通部分の間に大きな親水性酸性ドメインがループ構造をなしており、主要な機能部位を提供しているものと考えられている。そこでTM6-TM7領域をコードするcDNAを主なターゲットにPS1の結合因子を探索した。ヒト脳より抽出したmRNAを用いて、RT-PCRにてTM6-TM7領域をコードするcDNAをクローニングした。PS1cDNAをpLexAベクターに組み入れたものをターゲットして、pB42ADベクターに組み入れたヒト成人脳cDNAライブラリーをYeast two hybrid systemを用いてスクリーニングを行った。結果は有意の陽性クローンは得られなかった。この間PS1は、成熟脳よりも胎児脳でその発現が高いことが報告され、PS1の関連蛋白の検出レベルも高いことが期待される胎児脳のcDNAライブラリーを用いて再度Yeast two hybrid systemによるスクリーニングを行った。結果はまたしても有意の陽性クローンは得られなかった。そこでこのシステムに換え、ヒトPS1の高発現系トランスジェニックマウス(Tgマウス)を作製し、このTgマウス脳内で高発現PS1と結合する因子の探索に着手した。マウスプリオン遺伝子プロモーターにヒトPS1cDNAを組み込んだconstructよりTgマウスを作製し、マウス脳内でPS1蛋白の高発現を確認した。今後このヒトPS1高発現系Tgマウスを用いて、PS1と反応する機能蛋白の探索に取り組む予定である。

Causes of early-stage hysteritis-type familial erythema disease, biological explanation of functions, Yeast two hybrid The system uses いてヒト脳cDNA ライブラリーよりPS1 and combines the する factor をスクリーニングした. PS1 and 7 are between the aqueous membrane penetration area and the membrane protein penetration area between No. 6 (TM6) and No. 7 (TM7)に大きなhydrophilic acidic acidic ドメインがループstructure をなしており, main functional parts をprovide しているものと卡えられている.そこでTM6-TM7 field をコードするcDNAを主なターゲットにPS1のbinding factorをExplorationした.ヒト脳より extracted the したmRNA を using いて, RT-PCR TM6-TM7 field をコードするcDNA をクローニングした. p B42AD ベクターに集团み入れたヒト adult cDNA ライブラリーをYeast Two hybrid systems are used in the field. The result is a positive positive result.この间PS1は, Mature 脳よりも fetal 児脳でその発appears high いことがreport され, PS1-related proteinの検出レベルも高いことがLooking forward to される特児脳のcDNAライブラリーを用いてYeast again two hybrid systemによるスクリーニングを行った. The result is that the positive result is the positive result. Tgマウス)をproduced by このTgマウス脳内で高発appears on PS1 and combines the exploration of するfactor and starts with した.マウスプリオン缝子プロモーターにヒトPS1cDNAを组み込んだconst ructよりTgマウスをproducedし,マウス脳内でPS1 proteinの高発appears and confirmedした. From now on, the PS1 high-definition system Tgマウスを will be used to explore and explore the PS1 anti-anti-functional protein.

项目成果

Parchi P, Capellari S, Chen SG, Petersen RB, Gambetti P, Kopp N, Brown P, Kitamoto T, Tateishi J, Giese A, Kretzschmar H: "Typing prion isoforms"Nature. 386. 232-233 (1997)

Parchi P、Capellari S、Chen SG、Petersen RB、Gambetti P、Kopp N、Brown P、Kitamoto T、Tateishi J、Giese A、Kretzschmar H：“朊病毒亚型的分型”自然。

Shibuya S, Shin R-W, Higuchi J, Tateishi J, Kitamoto T.: "Codon 219 Lys allele of PRNP is not found in sporadic Creutzfeldt-Jakob disease." Ann Neurol. (in press).

Shibuya S、Shin R-W、Higuchi J、Tateishi J、Kitamoto T.：“在散发性克雅氏病中未发现 PRNP 的密码子 219 Lys 等位基因。”

Kawasaki K, Wakabayashi K, Kawakami A, Higuchi M, Kitamoto T, Tsuji S, Takahashi H: "Thalamic form of Creutzfeldt-Jakob disease or fatal insomnia-report of a sporadic case with normal prion protein genotype"Acta Neuropathol. 93. 317-322 (1997)

Kawasaki K、Wakabayashi K、Kawakami A、Higuchi M、Kitamoto T、Tsuji S、Takahashi H：“克雅氏病的丘脑形式或致命性失眠-具有正常朊病毒蛋白基因型的散发病例的报告”神经病理学报。

Tanake Y, Minematsu K, Moriyasu H, Yamaguchi T, Yutani C, Kitamoto T, Furukawa H.: "A Japanese family with a variant of Gerstmann-Transsler-Scheinker disease." J.Neurol.Neurosurg.Psych. 62. 454-457 (1997)

Tanake Y、Minematsu K、Moriyasu H、Yamaguchi T、Yutani C、Kitamoto T、Furukawa H.：“一个患有 Gerstmann-Transsler-Scheinker 病变体的日本家庭。”

Shin R-W, Ogino K, Kondo A, Saido CT, Trojanowski JQ, Kitamoto T, Tateishi J: "Amyloid b-protein(Ab)1-40 but not Ab1-42 contributes to the experimental formation of Alzheimer disease amyloid fibrils in rat brain"J. Neurosci.. 17. 8187-8193 (1997)

Shin R-W、Ogino K、Kondo A、Saido CT、Trojanowski JQ、Kitamoto T、Tateishi J：“淀粉样 b 蛋白 (Ab)1-40 但不是 Ab1-42 有助于大鼠脑中阿尔茨海默病淀粉样原纤维的实验形成