内耳・脳幹の神経系情報伝達に関するホスホリパーゼCについての組織化学的研究

内耳和脑干神经系统信息传递相关磷脂酶C的组织化学研究

• 批准号: 09671753
• 负责人: 坪井 康浩
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: 宮崎医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09671753/
• 关键词: 内耳; 免疫組織化学; ホスホリパーゼC; モルモット

【研究目的】 外有毛細胞の細胞膜で神経伝達の中心として機能しているのはホスホリパーゼCであることが知られている。しかしこれが内・外有毛細胞の機能分化にどのように関与しているかは確認されていない。このホスホリパーゼCにはアイソザイムグループとしてβ、γ、δの3つが存在する。近年さらにβ1〜4、γ1、2、δ1、2と合計8種類が分類され、それぞれ特異抗体によりホスホリパーゼCの可視化が可能になってきた。本研究の目的はこれらの特異抗体を用いて1)成熟モルモットの蝸牛有毛細胞及び球形嚢、卵形嚢、三半規管、さらに脳幹の蝸牛神経核においてホスホリパーゼCの局在を検討する。2)胎生後期から生後2、3週頃までの発生段階におけるホスホリパーゼCアイソザイムの発現を明らかにし内耳-脳幹における意義を検討することにある。【研究実績】 これまでホスホリパーゼCが豊富に存在することが報告されている脳を試料として用い、200倍と1000倍の高濃度の1次抗体をホルマリン系の固定液であるホルマリン、チンクホルマリンさらにアルコール系の固定液であるカルノア液と組合せ通常のDAB反応を行った。その結果β1は4%ホルマリンとチンクホルマリンを用いると染色性が高いが、カルノア液を用いると全く染色されなかった。同様にβ3とγ2はチンクホルマリンでのみ染色され他は無染色であった。β2、4、γ1、δ2はこれまで文献に記載されているサポニンやペプシン処理を組み合わせ染色性を高める条件を模索中である。最適な固定条件が決定すれば内耳や脳幹で行う予定である。現在β1、3とγ2に関してはチンクホルマリンで固定した生後0日目から36ヶ月目までの動物試料を作成中である。

[Objective] The cell membrane of outer hairy cells is the center of the brain, and the function is the center of the brain. The functional differentiation of inner and outer hairy cells is confirmed. This is the first time that a person's name has been changed. In recent years, 8 kinds of β1 ~ 4, γ1, 2, δ1 and 2 have been classified into different types. The purpose of this study is to investigate the development of mature snail hairy cells and the development of mature snail nuclei with spherical, oval, triangular and semi-circular tubes. 2)The significance of the development stage of the postnatal period from 2 to 3 weeks after birth is discussed. [Study results] The presence of high concentrations of primary antibodies in the sample was reported to be medium, 200-fold and 1000-fold. The result is that β1 is 4% higher than β 1. The same β3 and γ2 are not stained.β2, 4, γ1, δ2 are described in the literature. The optimal fixed condition determines the behavior of the inner ear. Now β1, 3 and γ2 are related to the preparation of animal samples from 0 to 36 days after birth.