MEK1阻害薬のくも膜下出血後脳血管攣縮および認知機能障害に対する治療効果の検証

MEK1抑制剂对蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛及认知功能障碍的治疗效果验证

• 批准号: 26462359
• 负责人: 佐々木 俊弘
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-01 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-26462359/
• 关键词: くも膜下出血; ケルセチン; pERK1/2; 脳血管攣縮

本研究では、くも膜下出血（以下SAH）後の脳血管攣縮の原因の一つに MEK-ERK 経路の活性化が関与していることに着目し、ERK1/2 抑制作用を有する天然フラボノイドのケルセチンの投与がSAH後の脳血管攣縮を予防するかを、ラットSAHモデルを用いて検証した。ラットSAHモデルの作成：SDラットを用いた。全身麻酔、人工呼吸下で脳定位固定装置に固定し、bregmaより前方6.5mmにスパイラル針を挿入後、SAH群には自己動脈血(450μl)を投与した。Sham群には同量の生理食塩水を投与した。ラットSAHモデルの死亡率は約20％であり、モデルとしては問題なかった。SAH発症後48時間後のケルセチンによるERK1/2抑制効果の評価：①SAH後60分にケルセチン（50mg/kg/day）を投与した。ランダムにVehicle 群、Sham群も作成。②SAH発症48時間後の深麻酔下にラットを還流固定した。③HE染色法を用いた脳血管攣縮に対する効果には優位差を認めなかった。続いて免疫染色法を用いて、脳動脈血管壁におけるpERK1/2の発現を観察したが、ケルセチンのERK1/2抑制効果も優位差を認めなかった。本年度はウェスタンブロット法を用いて、pERK1/2の発現を観察した。最初は還流掖で固定したサンプルを用いて前頭前野のpERK1/2を定量したが、結果が安定しなかったため、サンプリングまでの時間を短縮する目的で還流を省いて測定したが結果は大きく変化無かった。そのため、以降は手技が簡単な還流をしない方法で実験を行なった。手技を変えたが、前頭前野で優位差を認めなかった。更に、海馬、大脳皮質、小脳についても同様に定量を行なったか優位差を認めなかった。ラットSAHモデルにおいて、SAH発症後60分でのケルセチン投与は、pERK1/2の抑制効果、脳血管攣縮の予防効果は認めなかった。

This study is aimed to explore the relationship between activation of MEK-ERK pathway and ERK1/2 inhibition in the pathogenesis of vascular contracture after submembranous hemorrhage (SAH). SAH After the whole body anesthesia and artificial respiration, the positioning fixture was fixed, the bregma was inserted 6.5 mm in front, and the SAH group was injected with its own arterial blood (450μl). Sham is the same amount of physiological food and water. The mortality rate is about 20%. Evaluation of ERK1/2 inhibition effect 48 minutes after SAH: ① Administration of ERK 50mg/kg/day 60 minutes after SAH Vehicle group and Sham group are created.②SAH symptoms 48 hours after the deep anesthesia under the flow of fixed③HE staining is used to identify the optimal position difference for vascular contracture. The expression of pERK1/2 in the vascular wall was detected by immunostaining, and the optimal level of ERK1/2 inhibition was identified. This year, the development of pERK1/2 has been observed in the use of different methods. Initially, the flow rate was fixed and the pERK1/2 of the previous field was quantified. The result was stable and the time was shortened. The flow rate was reduced and the result was large. The method is simple and simple. Hand skill, front field The hippocampus, large cortex, small cortex and small cortex are the same. SAH treatment, 60 minutes after SAH onset, inhibition of pERK1/2, prevention of vascular contracture