染色体複製起点へのヘリカーゼ導入機構:開始複合体の機能構造とその分子動態の解明
解旋酶引入染色体复制起点的机制:阐明起始复合物的功能结构及其分子动力学
基本信息
- 批准号:22KJ2423
- 负责人:
- 金额:$ 1.09万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for JSPS Fellows
- 财政年份:2023
- 资助国家:日本
- 起止时间:2023-03-08 至 2024-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
染色体DNA複製は染色体上の複製起点領域から両方向に開始される。この基本的な原理がどのような分子機構によって支えられているのかは未だ解明されていない。その原因としては開始因子DnaAを主とする複製開始複合体が高次で動的な動態をもつため分子メカニズムの解析が困難であったことが大きい。しかしながら大腸菌では近年、染色体複製起点領域に形成される複製開始複合体の高次構造解明が大きく進歩したことで、複製開始複合体が機能の異なる左側と右側の二つのサブ複合体から構成されることが明らかになった。また、左側複合体が複製起点の二重鎖DNAを一本鎖化する分子機構までが解明された。本研究では、この新たな進展を大いに活用して、複製開始複合体が一本鎖化したDNA部位へと複製ヘリカーゼを両方向に装着するまでの分子動態を解析する。2年計画の初年度である2022年度においては、まず左側・右側DnaAサブ複合体のそれぞれと複製ヘリカーゼとの相互作用を解析するため多様な変異oriCプラスミドなどを構築した。これらを多様な変異DnaAタンパク質や複製ヘリカーゼタンパク質と試験管内で組み合わせ、DnaAのプロトマーレベルで生化学的に複製ヘリカーゼ装着活性を解析した。また、これらの結果は染色体oriCに同様の変異をもつ大腸菌変異株を用いた遺伝学的解析によっても検証した。さらに、左側・右側DnaAサブ複合体が互いに相互作用するかについても生化学的に検証した。
Chromosome DNA replication begins in the direction of the replication origin field on the chromosome. The basic principle of this is that the molecular mechanism is divided into two parts. The reason for this is that the replication initiation factor DnaA is the main factor, and the replication initiation complex is difficult to analyze because of the high order dynamics. In recent years, Escherichia coli has been formed in the domain of chromosome replication origin, and the higher-order structure of replication initiation complex has been clarified. The replication initiation complex has different functions on the left and right sides. The molecular machinery of the double-locked DNA, which is the origin of replication, is explained. This study makes great use of this new progress in the analysis of molecular dynamics of replication-initiation complexes, which are located in DNA sites and in replication directions. In the first year of the 2-year plan, the left side and the right side of the DnaA complex were analyzed and constructed. This is a multi-species assay for DNA replication in vitro. It is a biochemical assay. The result is that the chromosome oriC is the same as the chromosome oriC and the chromosome oriC is different from the chromosome oriC and the chromosome oriC is different from the chromosome oriC. The interaction between the DnaA complex on the left and the right is demonstrated by biochemical evidence.
项目成果
期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Diversity and conservation in the initiation mechanisms of the Escherichia coli replication origin oriC
大肠杆菌复制起点oriC启动机制的多样性和保守性
- DOI:
- 发表时间:2022
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Tsuomu Katayama;Ryusei Yoshida;Chuyuan Lu;Kazuma Korogi;Takumi Tsuruda;Kazutoshi Kasho;Shogo Ozaki
- 通讯作者:Shogo Ozaki
Mechanisms for bacterial origin unwinding mediated by DnaA and HU, a ubiquitous nucleoid-associated protein
DnaA 和 HU(一种普遍存在的类核相关蛋白)介导的细菌起源解旋机制
- DOI:
- 发表时间:2022
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Ryusei Yoshida;Shogo Ozaki;Hironori Kawakami;and Tsutomu Katayama
- 通讯作者:and Tsutomu Katayama
大腸菌染色体の開始複合体における複製ヘリカーゼ装着の多様な分子機構
大肠杆菌染色体起始复合物中复制解旋酶附着的多种分子机制
- DOI:
- 发表时间:2022
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:片山 勉;吉田竜星;鶴田 匠;興梠和真;加生和寿;尾﨑省吾
- 通讯作者:尾﨑省吾
細菌染色体の複製開始機構において複製起点が一本鎖へと開裂される普遍分子メカニズムの探究
细菌染色体复制起始机制中复制起点切割成单链的通用分子机制探讨
- DOI:
- 发表时间:2022
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:吉田竜星;尾﨑省吾;川上広宣;片山 勉
- 通讯作者:片山 勉
バクテリア界における染色体複製起点の開裂反応の共通原理:核様体タンパク質HUとDnaAに依存した複製起点開裂の分子機構
细菌界染色体复制起点切割反应的共同原理:复制起点切割依赖于核蛋白HU和DnaA的分子机制
- DOI:
- 发表时间:2022
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:吉田竜星;尾﨑省吾;川上広宣;片山 勉
- 通讯作者:片山 勉
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尾崎 省吾
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