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真核生物の染色体DNA複製再構成系の確立

真核染色体DNA复制和重排系统的建立

基本信息

批准号：
20657028
负责人：
水島徹
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20657028/
关键词：
真核生物染色体DNA複製生化学的解析 ORC pre-RC DNA複製 Cdc6p

项目摘要

真核生物の染色体DNA複製研究の大きな障害になっているのは、酵母を始め真核生物では染色体DNA複製の試験管内再構成系が確立されていないために、生化学的解析が充分に行えないことである。遺伝学的研究から、真核生物の染色体DNA複製反応は、複製開始点に順番に種々の因子が結合して開始されることが示唆されている。複製開始点に常に結合しているORC(Origin Recognition Complex)にまずCdc6pが結合し、次にCdtlpとMCMが結合し、pre-RCと呼ばれる複製前複合体がG1期に形成されることがその第一段階と考えられている。最近我々は、真核生物の染色体DNA複製の最初の段階であり、かつ律速段階と考えられている、origin DNA(複製開始点を含むDNA)上でのORCとCdc6pによる複合体形成の試験管内再構成に、酵母を使って世界で初めて成功した(Mizushima et al. Genes&Dev. 2000)。また最近、この複合体にさらにCdtlpとMCMを結合させることにより、pre-RCを試験管内で再構成することに成功した。今後は、このシステムを土台に真核生物の染色体DNA複製の試験管内再構成系を確立することである。具体的には、pre-RCがサイクリン依存性キナーゼにより活性化されると共に、Cdc45pなどが結合しpre-ICが形成されるので、この複合体にサイクリン-サイクリン依存性キナーゼ複合体やCdc45pなどを作用させ、pre-ICを試験管内で再構成する。

The study of chromosome DNA replication in eukaryotes is based on the establishment of a recombinant system for chromosome DNA replication in eukaryotes and biochemical analysis. The research of genetics includes the reverse of chromosome DNA replication in eukaryotes, the start of replication, the sequence of seed factors and the initiation of binding. The ORC(Origin Recognition Complex) at the start point of replication is often associated with Cdc6p, Cdtlp, MCM, pre-RC, and pre-replication complexes at the first stage of G1. Recently, the first stages of chromosome DNA replication in eukaryotes have been successfully studied, and ORC and Cdc6p complexes have been formed on the origin DNA(replication start point including DNA). 2000)。Recently, the complex has been successfully reorganized into two parts: Cdtlp and MCM. In the future, chromosome DNA replication in eukaryotes will be established. Specifically, the pre-RC is activated, the Cdc45p is combined, and the pre-IC is formed. The complex is re-formed in the tube.