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真核生物の染色体DNA複製再構成系の確立と複製開始制御機構の解明

真核染色体DNA复制重建体系的建立及复制起始控制机制的阐明

基本信息

批准号：
16026227
负责人：
水島徹
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16026227/
关键词：
染色体DNA複製再構成系複製開始制御機構 ATP ORC

项目摘要

本研究の目的は、大腸菌での研究経験を活かしながら、酵母のDNA複製開始制御機構を、試験管内再構成系の確立、及び複製開始蛋白質に結合しているアデニンヌクレオチドによる制御という二つの観点から、生化学的に研究することである。我々は、ATPと結合できない変異Orc5pを発現する酵母変異株、orc5-A株を構築し、その解析を行った。具体的には、(1)ORC、及びCdc6pに関して、ATP/ADP結合、及びATPase活性を調節する因子の検索を行う、及び(2)ORCのATP/ADP結合、及びATPase活性に開する遺伝学的解析を行う、(3)真核生物の染色体DNA複製全体の再構成を行う、以上3点の研究を行う。(1)ORC、及びCdc6pに関して、ATP/ADP結合、及びATPase活性を調節する因子の検索に関して今年度我々は、酵母核粗抽出液中に、ORC、及びCdc6pのATP/ADP結合、及びATPase活性を促進する活性を見いだした。さらにこれらの活性を、SDS-PAGE上単一なバンドを示すまでに精製した。(2)ORCのATP/ADP結合、及びATPase活性に開する遺伝学的解析に関して今年度我々は、昨年度構築したATPと結合できない変異Orc5pを発現する酵母変異株、orc5-A株を用いて、この株ではOrc5pサブユニットがユビキチン化されるために、プロテアソームにより分解されることを見いだした。(3)真核生物の染色体DNA複製全体の再構成に関して今年度我々は、再構成に必要な全ての蛋白質の精製を完了した。以上の結果から、Orc5pのATP結合活性は、Orc5pとOrc4pの相互作用に必要であり、この相互作用はORCが細胞内で安定に存在するため重要であることが考えられる。

はの purpose, this study coliform での research 経験を live かしながら, yeast の DNA replication began to imperial institutions を, reconstitution is の established, test tube and び duplicate protein にしているアデニンヌクレオチドによる suppression という two つの観 point から, the study of biochemistry にすることである. I 々は, ATP とできない - different Orc5p を発 now する - different strains of yeast, orc5 - A plant を build し, その parsing line をった. Specific には, (1) the ORC and び Cdc6p に masato して, ATP/ADP, and びを ATPase activity regulating する factor の検をう, and び (2) the ORC の ATP/ADP combination and び ATPase activity に open する heritage 伝 line analytical をう, (3) all eukaryotes の chromosome DNA replication <s:1> then form を lines う, and the above three points <s:1> study を lines う. (1) the ORC and び Cdc6p に masato して, ATP/ADP, and びを ATPase activity regulating する factor の検 cable に masato して this year I 々は nuclear に in crude extract, yeast, ORC, and び Cdc6p の ATP/ADP combination and び ATPase activity を promote する active を see いだした. Youdaoplaceholder0 ドをれられらを active を SDS-PAGE 単 - なバドをドをすまでにすまでに refined たた. (2) the ORC の ATP/ADP combination and び ATPase activity に open する heritage 伝 learn analytical に masato して this year I 々は, yesterday's annual construct した ATP と combining できない - different Orc5p を発 now する - different strains of yeast, orc5 - A plant をいて, この strains では Orc5p サブユニットがユビキチン change され Youdaoplaceholder0, プロテアソるためにムによムによるためにるために decomposition されるだとを see だだた. (3) The complete replication of DNA in eukaryotes' <s:1> chromosomes is related to the に of て. This year, I have completed the 々々, the に of the necessary な, the complete て, and the complete refinement of <s:1> protein <e:1> を. の above results から, Orc5p の ATP binding activity は, Orc5p と Orc4p のに interaction necessary であり, この interaction は ORC がで stability に exists in cells するため important であることが exam えられる.