一細胞RNA解析によるアテローム性動脈硬化症の新規病態解明

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本研究では、アテローム性動脈硬化症モデルであるApoE-/-マウスへの高脂肪食投与前後の大動脈に関して、一細胞RNA解析を行った結果、動脈硬化の進展と共に骨軟骨系細胞や炎症マーカーを高発現する炎症性線維芽細胞の出現を認めており、それぞれに着目して研究を進めた。1) 炎症性線維芽細胞について疾患モデルマウスにおける炎症性線維芽細胞の関連マーカーの発現変化を確認したところ、Cxcl1、Cxcl14、Lpb等の因子も同様に疾患の進行と共に上昇することが確認できた。2) 骨軟骨系細胞について同様に、疾患モデルマウスにおける骨軟骨系細胞の関連マーカーの発現変化を確認したところ、Bhlhe40、Sox9、Fzd9等の着目因子の発現が疾患の進行と共に上昇することが確認でき、病態形成にこれらの因子が関与していることが検証できた。次に、平滑筋細胞のマーカーであるSm22をtd-Tomatoで蛍光発症させるトランスジェニックマウスの動脈硬化モデルを作成し、その大動脈をBhlhe40で染色してtd-Tomatoとの分布を確認したところ、Bhlhe40とtd-Tomatoの分布は一致しており、骨軟骨系細胞は平滑筋細胞由来であると考えられた。さらに、Bhlhe40の平滑筋細胞における疾患への影響を評価するため、Bhlhe40の平滑筋特異的ノックアウトマウスの動脈硬化モデル(ApoE－/－ / Bhlhe40 flox/flox / SM22α-Creマウス)を作成した。コントロールとしてはApoE－/－ / SM22α-Creマウスを用いた。これらのマウスに高脂肪食を負荷して動脈硬化を進行させた後、大動脈を摘出した。今後、それぞれの群における大動脈のプラークの程度を、各種染色を用いて定量評価、比較を行う。