Control of epithelial ion channels by molecular interaction with modulating proteins heterologously expressed and in the native tissue

通过与异源表达和天然组织中的调节蛋白的分子相互作用来控制上皮离子通道

• 批准号: 5202382
• 负责人: Professor Dr. Karl Kunzelmann
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Physiologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1998-12-31 至 2001-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5202382?language=en
• 关键词: Control; epithelial; ion; channels; molecular

In vielen Fällen funktionieren epitheliale Ionenkanäle nicht für sich alleine. Experimentelle Arbeiten aus jüngerer Zeit zeigen, daß Aktivität und Eigenschaften von Ionenkanälen und Transportern in großem Maß von zusätzlichen modulierenden Proteinen abhängt. Ein von unserer Arbeitsgruppe gut untersuchtes und klinisch relevantes Beispiel stellt die Regulation des epithelialen Na+ Kanals (ENaC) durch den Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) dar. Hier führt die defekte Regulation des ENaC bei Zystischer Fibrose (CF) zu einer erhöhten Na+-Resorption in den Atemwegen und im Intestinaltrakt der betroffenen CF-Patienten. Innerhalb des hier vorgestellten Projektes werden wir den molekularen Mechanismus der CFTR abhängigen Regulation von ENaC und anderer epithelialer Ionenleitfähigkeiten sowie deren Modulatoren in vitro identifizieren. Hier werden Methoden, wie die der gezielten Mutagenese, Coexpression potentiell wechselwirkender Proteine und deren dominant negativen Formen in Xenopus Oozyten und sowie die Klonierung beteiligter Proteine durch RACE-PCR und eine verbesserte Zwei-Hybrid-Methode zum Einsatz kommen. Die so in vitro gewonnenen Ergebnisse werden im nativen, hochdifferenzierten epithelialen Gewebe auf ihre physiologische Signifikanz hin untersucht. Hier soll in einem neuen methodischen Ansatz die adenovirale Expression am nativen ex vivo Epithel zum Einsatz kommen.

在 vielen Fällen Funktionieren 上皮细胞 Ionenkanäle nicht für sich alleine 中。实验工作是年轻人的时代、活动和特征，以及在蛋白质 abhängt 中的主要模块的运输。在囊性纤维化跨膜电导调节器 (CFTR) 中，上皮细胞 Na+ 通道 (ENaC) 的调节是肠道工作组的研究和相关临床工作的一部分。在 Zystischer Fibrose (CF) 的 ENaC 调节中，Na+ 在 Atemwegen 和 Intestinaltrakt der betroffenen CF-Patienten 中吸收。该项目的内部项目涉及 CFTR 分子机制的 ENaC 调节和上皮细胞离子调节的体外鉴定。该方法是一种诱变、蛋白质共表达和显性失活的方法，是爪蟾 Oozyten 中蛋白质的克隆，也是 RACE-PCR 中蛋白质克隆和两种混合方法的详细说明。因此，在体外，其在本机中的作用是不同的，其上皮细胞在生理学上具有不同的意义。腺病毒在新方法中是在原生离体上皮细胞中表达的。