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ウイルス癌遺伝子導入細胞を用いたヒト癌遺伝子の単離とヒトにおける発癌機構の解析

使用病毒癌基因转染细胞分离人类癌基因并分析人类致癌机制

基本信息

批准号：
60218029
负责人：
藤永けい
金额：
$ 6.08万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、ウイルスおよび細胞性癌遺伝子あるいはそれらの変異遺伝子を導入した各種ゲノム改変細胞株を樹立し、これを用いて新しい癌遺伝子の単離を試みると同時に、ヒト癌の発生機序をさぐることを目的とする。本年度は前年度に引き続いてゲノム改変細胞株の樹立と、これを用いて癌遺伝子の単離実験を行ない、以下の成果を得た。1)活性型ras遺伝子によるアデノウイルス4型癌遺伝子導入細胞のトランスホーメーション:ヒト膀胱癌由来の活性型ras遺伝子を、アデノウイルス4型癌遺伝子導入細胞(4CY4-3)にトランスフェクトすると、明確なフォーカス形成を示し、フォーカス由来のトランスホーム細胞は完全なトランスホーム形質を示した。クローン化した正常c-Ha-rasやLTRを連結したクローン化正常c-Ha-rasは4CY4-3細胞にトランスホームフォーカスを形成しなかった。2)アデノウイルスE1B遺伝子導入非トランスホーム細胞株の樹立:機能的なアデノウイルス12型E1B遺伝子を導入した一連の非トランスホームラット3Y1細胞株を樹立した。このうちいくつかの細胞株は、アデノウイルスE1A遺伝子やLTRを連結したマウスC-myc遺伝子によってフォーカスを形成したことから、myc型ヒト癌遺伝子の単離に使用できると考えられる。3)アデノウイルス癌遺伝子導入細胞を用いたヒト癌遺伝子単離の試み:絨毛癌、肺癌、骨肉腫由来の癌細胞DNAを抽出しサザーン法で癌遺伝子の再編成や増幅の有無を調べたところ、肺腺癌転移巣の1例と骨肉腫の1例にそれぞれN-mycとC-mycの増幅が、別の骨肉腫の1例にc-erbB遺伝子の再編成が見い出された。これらの癌細胞DNAをアデノウイルス癌遺伝子導入細胞にトランスフェクトすることによって癌遺伝子の単離を試みている。出現したいくつかのフォーカスから細胞DNAを抽出し、トランスホーム活性の起源を検討中である。

The aim of this study is to establish and use new cell lines for the isolation of cellular cancer vectors, and to develop new cancer vectors. This year, compared with the previous year, the following results have been achieved: 1)Active ras gene transfer into cells with type 4 oncogene: origin of bladder cancer Active ras gene transfer into cells with type 4 oncogene transfer (4CY4 -3), origin of bladder cancer, origin of bladder cancer. The normal c-Ha-ras are linked to the normal c-Ha-ras 4CY4 -3 cells. 2) Introduction of E1B gene into non-native cell line: functional introduction of E1B gene into non-native cell line 3Y1. The cell line of this type is called E1A gene. LTR is linked to C-myc gene. 3) Attempts to isolate cancer genes by introducing cancer genes into cells: DNA from cancer cells derived from choriocarcinoma, lung cancer, and osteosarcoma was extracted using the DNA extraction method to determine the reassortment and increase of cancer genes. One case of lung adenocarcinoma metastasis and one case of osteosarcoma showed an increase in N-myc and C-myc, and one case of other osteosarcoma showed a reassortment of c-erbB genes. The DNA of the cancer cells was transferred into the cells, and the DNA of the cancer cells was isolated. The origin of cell DNA was investigated.