ets群遺伝子E1A-Fによるマトリックスメタロプロテアーゼ転写活性化と転移能

ets 组基因 E1A-F 的基质金属蛋白酶转录激活和转移潜力

• 批准号: 06280230
• 负责人: 藤永 けい
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06280230/
• 关键词: ets群遺伝子; 細胞外マトリックス分解酵素; MMP; 転写調節因子; トランス型転写活性化; アデノウイルスE1Aエンハンサー

1.E1AFによる細胞外マトリックス分解酵素遺伝子(MMP)の転写活性化:細胞外マトリックス分解酵素のプロモーターを組み込んだCATレポーターを構築し、E1AF遺伝子発現プラスミドとのcotransfection法で検討した。その結果、E1AFは3種類のMMP遺伝子 のプロモーター活性を10-20倍促進した。E1Aが間質コラーゲンを基質とするtype1コラゲナーゼ、基底膜コラーゲンを分解する92kD typeIVコラゲナーゼ、プロテオグリカンなどを分解するストロメリシンなど、細胞外マトリックス分解酵素のプロモーター活性をいづれも10-20倍、促進することを見い出した。特に、ets群転写因子による92kD typeIVコラゲナーZゼの活性は、本研究が最初である。2.E1AF遺伝子やMMP遺伝子の発現:細胞質RNAを抽出し、それぞれ特異的cDNAプローブを用いてノーザン法で検討した結果、浸潤/転移能が高い細胞にE1AF、および92KD typeIVコラゲナーゼ遺伝子の発現を確認した。3.E1AF発現細胞の樹立と運動能、浸潤能の測定:低浸潤能、低運動能のヒト乳癌細胞株に、E1AF発現プラスミドとG418マーカー遺伝子をcotransfectionし、G418耐性を利用してE1AF発現細胞株を分離した。細胞の運動能と浸潤能はフィブロネクチンをchemoattractantに使い、それぞれTranswellチャンバーとMatrigelinvasionチャンバーを用いて測定した。その結果、E1AF発現細胞に運動能と浸潤能の増大が見られた。。つまり、E1AF遺伝子のトランスフェクションによって、ヒト乳癌細胞を運動能ち浸潤能が高い細胞に変換できた。

1. E1AF に よ る extracellular マ ト リ ッ ク ス decomposition enzyme heritage 伝 child (MMP) の planning write activity: extracellular マ ト リ ッ ク ス decomposition enzyme の プ ロ モ ー タ ー を group み 込 ん だ CAT レ ポ ー タ ー を build し, E1AF but 伝 発 now プ ラ ス ミ ド と の cotransfection method で beg し 検 た. The そ <s:1> results showed that the 伝 subprogeny <e:1> プロモ <s:1> タ <e:1> activity of the three types of <s:1> MMP in E1AF <e:1> was を10-20 times promoted by を た. E1A が interstitial コ ラ ー ゲ ン を matrix と す る type1 コ ラ ゲ ナ ー ゼ, basement membrane コ ラ ー ゲ ン を decomposition す る 92 kd TypeIV コ ラ ゲ ナ ー ゼ, プ ロ テ オ グ リ カ ン な ど を decomposition す る ス ト ロ メ リ シ ン な ど, extracellular マ ト リ ッ ク ス decomposition enzyme の プ ロ モ ー タ ー active を い づ れ も 10-20 times, promote す る こ と を see い out し た. Special に, ets group 転 write factor による92kD typeIVコラゲナ に Zゼ <s:1> activity, this study が initial である. 2. E1AF heritage 伝 child や MMPS but 伝 の 発 now: を cytoplasmic RNA extraction し, そ れ ぞ れ specific cDNA プ ロ ー ブ を with い て ノ ー ザ ン method で beg し 検 た results, high infiltration/planning to move to が い cells に E1AF, お よ び 92 kd typeIV コ ラ ゲ ナ ー ゼ heritage 伝 son の 発 を now confirmed し た. 3. E1AF 発 の is cells can establish と movement, can infiltrate の measure: low infiltration, low exercise can の ヒ ト breast cancer cell lines に, E1AF 発 now プ ラ ス ミ ド と G418 マ ー カ ー heritage 伝 son を cotransfection し, G418 patience を し て E1AF 発 now cell lines を separation し た. Cell の movement can は と infiltration フ ィ ブ ロ ネ ク チ ン を chemoattractant に い, そ れ ぞ れ Transwell チ ャ ン バ ー と Matrigelinvasion チ ャ ン バ ー を with い て determination し た. Youdaoplaceholder0 そ results: E1AF shows an increase in cell に motility と infiltration capacity <s:1> が see られた. つ ま り, E1AF but 伝 の ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン に よ っ て, ヒ ト breast cancer cells を movement can が high い ち infiltrating cells に variations in で き た.

项目成果

Hotsubo,T: "Detection of human cytomegalovirus DNA in breast milk by means of polymerase chain reaction." Microbiol.Immunol.38. 809-811 (1994)

Hotsubo,T：“通过聚合酶链式反应检测母乳中的人类巨细胞病毒 DNA。”

Fujinaga,Y: "Sequence variation of human papillomavirus type 16 E7 in preinvasiveand invasive cervical neoplasias." Virus Gene. 9. 85-92 (1994)

Fujinaga,Y：“16 型 E7 型人乳头瘤病毒在浸润前和浸润性宫颈肿瘤中的序列变异。”

Higashino,F.: "Ets-related protein E1A-F can activate three different matrix metalloproteinase gene promoters." Oncogene. (in press). (1995)

Higashino,F.：“Ets 相关蛋白 E1A-F 可以激活三种不同的基质金属蛋白酶基因启动子。”

Yoshida,K.: "Transcriptional regulation of the adenovirus R1A gene." Current Topics Microbiol.Immunol.(in press).

Yoshida,K.：“腺病毒 R1A 基因的转录调控。”