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神経活性ペプチドの生成,分解に関与するプロテアーゼ系の解析

参与神经活性肽产生和降解的蛋白酶系统分析

基本信息

批准号：
60226003
负责人：
高橋健治
金额：
$ 0.83万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

神経活性ペプチドの生成、分解に関与するプロテアーゼ系の解析の一環として、ウシ脊髄の可溶性分画および細胞骨格分画に存在する二種のカルシウム依存中性プロテアーゼを精製し、その諸性状を比較検索するとともに、各種の神経ペプチドおよび関連ペプチド等に対する作用特異性を比較検索した。細胞骨格結合性プロテアーゼは、細胞骨格分画より0.6MKCLで抽出後、有機水銀セファロース4B、カゼインセファロース4BおよびセファロースCL-6Bカラムによるクロマトグラフィーにより均一標品として精製した(精製度3300倍)。可溶性酵素は可溶性分画をDEAE-セルロースカラムクロマトグラフィーにより分画後、同様なクロマトグラフィーにより精製した。両酵素とも、分子量約10万で7.9万と2万のサブユニットから構成される。両者とも0.5mM【Ca^(2+)】濃度で顕著な活性を示し、種々のチオールプロテアーゼ阻害剤により強く阻害された。0.1-0.2mM【Ca^(2+)】濃度下で、可溶性酵素はニューロフィラメント蛋白質の分子量6万8千と16万の成分を主に分解したが、結合型酵素では同様な分解に2倍の濃度の【Ca^(2+)】を必要とした。両酵素を種々の神経ペプチド等に作用させ、生成物を逆相カラムを用いる高速液体クロマトグラフィーで分離し、アミノ酸組成分析により同定し、切断点を比較した。この結果、用いたペプチドの中では、ダイノルフィン(1-13)、α-およびβ-ネオエンドルフィン中のArg-ArgまたはArg-Lys結合が特異的に分解されること、また、ニューロテンシン中のTyr-GLu、アンジオテンシン中のTyr-Ile、酸化インスリンB鎖中のTyr-Leuの各結合が特異的に分解されることが判明した。一方、Leu-エンケファリン、Met-エンケファリン、BAM-12Pは分解されなかった。また、これらの結果は二つの酵素で大差なかった。

A cycle of analysis of the production, decomposition and distribution of neuroactive molecules is described. There are two kinds of neuroactive molecules: soluble molecules and cytoskeletal molecules. The two kinds of neuroactive molecules depend on the neutral molecules. The cellular bone binding property was determined by 0.6MKCL. After extraction, the organic mercury content was determined by 4B, 4B and CL-6B. The purity was determined by 3300 times. Soluble enzymes are soluble in DEAE-100 and purified after analysis. The enzyme has a molecular weight of about 100,000 and a molecular weight of 79,000 and 20,000. When the concentration of Ca^(2+) is 0.5 mM, the activity is shown, and the concentration of Ca ^(2 +) is shown. At 0.1- 0.2 mM [Ca^(2+)] concentration, soluble enzymes are required to decompose 68,000 to 160,000 components of protein, while conjugated enzymes are required to decompose twice as much [Ca^(2+)]. The enzyme is used in the reverse phase analysis of the enzyme, and the product is used in the separation of the enzyme and the acid composition analysis. These results were used to identify the specific decomposition of Arg-Arg and Arg-Lys in the α-and β-amino acids, Tyr-Glu in the α-and β-amino acids, Tyr-Ile in the α-and β-amino acids, and Tyr-Leu in the β-amino acids. One side, Leu-, Met-, BAM-12P The result is that there is a big difference between two enzymes.