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大腸菌ATP依存性プロテアーゼLonの構造と機能

大肠杆菌ATP依赖性蛋白酶Lon的结构和功能

基本信息

批准号：
06261212
负责人：
高橋健治
金额：
$ 1.6万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06261212/
关键词：
大腸菌 ATP依存性プロテアーゼ超遠心分析

项目摘要

大腸菌ATP依存性プロテアーゼLonの分子形態をゲル濾過カラムクロマトグラフィー,電子顕微鏡撮影,超遠心分析により検討した.申請者らはLonの大量発現・精製系を確立し,それにより得られたプロテアーゼの中性溶液中(pH 7.8)での分子量が従来考えられていたものよりもはるかに大きいことを見出した.ゲル濾過カラムクロマトグラフィーでは分子量1,000,000以上の位置に溶出し,超遠心による分析では沈降係数36.8 S,分子量1,280,000であることが明らかとなった.これは,従来の報告(分子量87,000の4量体,分子量360,000)よりもはるかに大きい.このサンプルはSDS-ポリアクリルアミド電気泳動では単一の約90,000のバンドを示すため,12〜16量体として存在していることが示唆される.超遠心分析のデータより回転楕円体(oblate ellipsoiod)近似により大きさを計算すると長軸21.6nm,短軸6.6mmとなる.電子顕微鏡写真では25.3nm×17.7nmの大きさで観察され,さらに4つの小単位が観察された.したがって,これは4量体が4つ集合した16量体であると考えられる.さらに,pHを変化させて超遠心分析をすることにより,pHを上げていくと解離が進み8量体,4量体の存在が確認された.それらの沈降係数は21.1Sおよび12.6Sであった.またどのpHにおいて12量体は観察されず,Lonは16量体(35.8 S,pH7)【double half arrows】8量体(21.1S,pH9)【double half arrows】4量体(12.6S,pH11)のように解離・会合を行ってい

The molecular morphology of ATP dependent Escherichia coli was studied by electron microscopy and ultra-telecentric analysis. The applicant has established a large amount of production and purification system, and the molecular weight of the product has been determined by the test. The dissolution rate is higher than molecular weight 1,000,000, and the sedimentation coefficient is 36.8 S, molecular weight 1,280,000. The molecular weight is 87,000 and the molecular weight is 360,000. The SDS-P-P electrokinetic model is about 90,000 units, 12 to 16 units, and exists in about 90,000 units. The major axis is 21.6 nm and the minor axis is 6.6 mm. The electron microscope photo is 25.3nm×17.7nm and the large one is observed, and the small one is observed. The four volumes are collected together, and the sixteen volumes are collected together. In addition, the pH value of the solution is changed to 8 and 4 by telecentric analysis. The settlement coefficient is 21.1S 12.6S. The pH value of 12 molecules was measured, and Lon 16 molecules (35.8 S,pH7)[double half arrows] 8 molecules (21.1 S, pH9)[double half arrows] 4 molecules (12.6 S, pH11) were dissociated.