サケ・マス卵のホスビチンおよびリン含有ペプチドの化学的性状に関する研究

鲑鱼和鳟鱼卵中卵黄高磷蛋白和含磷肽的化学性质研究

• 批准号: 61560231
• 负责人: 鈴木 健
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: 東京水産大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61560231/
• 关键词: ニジマス卵; ホスビチン; リン含有ペプチド; 化学的性状; 高速液体クロマトグラフィー

ニジマス成熟卵にはリン含量の高いタンパク質のホスビチンのほかに、これより低分子のリン含有ペプチドが存在することをこれまでに報告してきたが、本研究ではこれらの化学的性状を明らかにしたいと考えた。ニジマス成熟卵にトリクロル酢酸溶液を加えホモジナイズし、エーテルでトリクロル酢酸を除去した後、エタノールを加えてリン含有ペプチドを析出させた。これを陰イオン交換樹脂Dowex1-×2カラム(1.6×55cm)にかけ、0.4Mピリジン-ギ酸緩衝液、pH5.5により分画したところ少なくも12の画分に分けられた。引き続いてこれらの中の主要な画分をゲルろ過Sephadex G-50カラム(1.6×95cm)に付し0.3M酢酸ナトリウム、pH4.5で溶出したところ、さらに2-3の画分に細分された。これらはおおむね分子量1.100-2.100および分子量4.200-5.500のペプチドから成り、それぞれセリンを主体とする特異的な構成アミノ酸パターンをもち、またセリン量にほぼ匹敵するリン酸を保有することを明らかにした。そこでこれらの分析結果を基にして15種のリン含有ペプチドについて推定アミノ酸構成を提示した。次ぎに、リン含有ペプチドを高速液体クロマトグラフのカラムAsahipak GS32OH(0.76×25cm)に添加し分離条件を検討したところ、溶出液として50mMリン酸ナトリウムpH7.0において最も分離が良く、アセトニトリル、n-プロパノールなどの有機溶剤の添加をしてもこれらの分離はあまり影響を受けないこと、またペプチドの検出法としてはo-フタルアルデヒドによる蛍光法よりも210nmによる紫外検出法のほうが良好であることを知った。このような高速液体クロマトグラフィによりリン含有ペプチドのクロマトグラムのパターンの特徴を明らかにすることができたので、この方法を用いて各種魚卵のリン含有ペプチドの特性および卵成熟中の変化を検討したいと考えている。

ニ ジ マ ス mature eggs に は リ ン content の high い タ ン パ ク qualitative の ホ ス ビ チ ン の ほ か に, こ れ よ り low molecular の リ ン contains ペ プ チ ド が exist す る こ と を こ れ ま で に report し て き た が, this study で は こ れ ら の chemical properties を Ming ら か に し た い と exam え た. ニ ジ マ ス mature eggs に ト リ ク ロ ル boggy acid solution を plus え ホ モ ジ ナ イ ズ し, エ ー テ ル で ト リ ク ロ ル を boggy acid to remove し た, エ タ ノ ー ル を plus え て リ ン contains ペ プ チ ド を precipitation さ せ た. こ れ を Yin イ オ ン exchange resin Dowex1 - x 2 カ ラ ム (1.6 x 55 cm) に か け, 0.4 M ピ リ ジ ン - ギ acid buffer, pH5.5 に よ り points draw し た と こ ろ less な く も 12 の draw points に け ら れ た. Lead き 続 い て こ れ ら の の な main draw points を ゲ ル ろ a Sephadex G - 50 カ ラ ム (1.6 x 95 cm) に し 0.3 M boggy acid ナ ト リ ウ ム, pH4.5 で dissolution し た と こ ろ, さ ら に 2-3 の draw points に subdivision さ れ た. こ れ ら は お お む ね molecular weight 1.100 2.100 お よ び molecular weight 4.200 5.500 の ペ プ チ ド か ら り, そ れ ぞ れ セ リ ン を subject と す る specific な constitute ア ミ ノ acid パ タ ー ン を も ち, ま た セ リ ン quantity に ほ ぼ match す る リ ン acid を retain す る こ と を Ming ら か に し た. そ こ で こ れ ら の analysis results を base に し て 15 の リ ン contains ペ プ チ ド に つ い て presumption ア ミ ノ acid を prompt し た. The ぎに and リ ペプチドを contain ペプチドを high-speed liquid ロ ロ トグラフ トグラフ カラム カラムAsahipak GS32OH (0.76 x 25 cm) に add し separation conditions を beg し 検 た と こ ろ, stripping liquid と し て 50 mm リ ン acid ナ ト リ ウ ム pH7.0 に お い て も separation く が good, most ア セ ト ニ ト リ ル, n - プ ロ パ ノ ー ル な ど の organic solvent added tonic の を し て も こ れ ら の separation は あ ま り を by け な い こ と, ま た ペ プ チ ド の 検 out method と し て は o - フ タ ル ア ル デ ヒ ド に よ る 蛍 method よ り も 210 nm に よ る uv 検 out の ほ う が good で あ る こ と を know っ た. こ の よ う な high-speed liquid ク ロ マ ト グ ラ フ ィ に よ り リ ン contains ペ プ チ ド の ク ロ マ ト グ ラ ム の パ タ ー ン の, 徴 を Ming ら か に す る こ と が で き た の で, こ の way を with い て fish の リ ン contains ペ プ チ ド の features お よ び eggs mature の variations change を beg し 検 た い と exam え て い る.

项目成果

Takeshi Suzuki: Nippon Suisan Gakkaishi. 52. 301-306 (1986)

铃木武：日本水产学会。