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サクラマス精巣DNAプライアーゼの精製と特異的阻害剤の検索

樱桃鲑鱼睾丸DNA普适酶的纯化及特异性抑制剂的寻找

基本信息

批准号：
61580126
负责人：
実吉峯郎
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.5月に選別した明け2才のサクラマス雄魚を恒温(12℃)飼育し、6月中旬(精子形成初期)より、7月中旬(精子形成後期)にかけて、1週毎にサンプリングし、採取した精巣は液体窒素で固定し、-80°に使用まで保存した。2.精巣をまず、塩を含まない緩衝液中でホモジナイズし、プライマーゼ活性をともなわないDNAポリメラーゼ【α_1】を抽出し、その遠心沈査を0.5MのKclを含む緩衝液で抽出し、DNAポリメラーゼ【α_2】-プライマーゼ,βおよびγを可溶化した。第1回ホスホセルロースカラムクロマトグラフィー後、50%飽和硫安分画により、プライマーゼ,γとβを分離した。ついで、DEAEセルローズ、第2回ホスホセルロース,ハイドロキシルアパタイト,セファデックスG150ゲル濾過,1本鎖DNAセルロースのカラムクロマトグラフィーを行い、γ活性を全く含まないプライマーゼ標品を得た。(比活性:α活性として、11,0000units/mg蛋白,プライマーゼ活性として、30000cenits/mg蛋白)後の阻害剤検索に於ける比較のためサクラマスヘルプスウィルス(OMV)感染細胞よりウイルス特異DNAポリメラーゼをも単離・精製を行った。3.精子形成期におけるDNAポリメラーゼ【α_1】と【α_2】-プライマーゼの活性変動を各期と対照しつつ解析したところ、【α_1】は、初期から後期に至ってその活性が減少していくのに対して、プライマーゼ-【α_2】は、後期に至るまで、その高い活性を保持しているという興味ある結果であった。4.プライマーゼ特異的阻害剤を検索する目的で、まず、糖部 2',3'位を変換したdCTPアナログを合成し、M13DNAを鋳型とする系で、その阻害効果を速度論的に解析した。その結果、2'-アジド-【2'_1】,3'-ddCTP,3'-アミノ-ddCTPに強いプライマーゼ阻害活性(Ki/km,0.30,0.40)を見出した。RNAポリメラーゼ、DNAポリメラーゼ各分子種における挙動と比較し、前者においてプライマーゼ選択性が優れていた。

1. In May, the males were incubated at a constant temperature (12 ℃), in the middle of June (in the early stage of spermatogenesis), in the middle of July (after spermatogenesis), in the middle of July (after spermatogenesis) and in the middle of July (after spermatogenesis). The sperm was fixed with liquid asphyxiant and preserved at-80 °. two。 The concentration of DNA in the solution, the activity of the extract, the concentration of DNA, the concentration of α _ 1, the concentration of DNA, the concentration of α _ 2, β, γ, α _ 1, α _ 1, α _ 1, α _ 1, α _ 1, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 1, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 1, α _ 1, α _ 1, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, γ, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ 2, α _ For the first time, please tell me that after the first time, 50% of the samples were separated from thioampere, and the samples were separated from each other. The following is the first time that you know what to do. In the second time, you need to know how to use it. In the second time, you know, the second time, the second, the second and the second. (specific activity: Alpha-activity, alpha-activity, alpha-bioactivity, alpha- 3. During spermatogenesis, the activity of DNA cycle in spermatogenesis phase was analyzed according to the analysis of the activity of each stage of spermatogenesis, from early stage to late stage. To keep the activity high, the results show that the taste is not good. 4. The purpose of this paper is to analyze the speed theory of the fruit of the Ministry of Sugar, which is 3'in position 3'of the Ministry of Sugar, the Ministry of Sugar, the department of sugar, the department of dCTP, the department of sugar, the department of sugar. The results showed that Ki/km,0.30,0.40 activity (Ki/km,0.30,0.40) was strongly expressed in 3-month-old CTP (3-month-1). RNA, DNA, and DNA are used to compare the performance of various molecular types, and the former is responsible for the selection of sex-related drugs.