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線虫C.elegns発生過程の遺伝子工学的研究

秀丽隐杆线虫发育过程的基因工程研究

基本信息

批准号：
62218004
负责人：
小原雄治
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は, C.elegansの発生過程に関わる遺伝子群の機能解析をめざして, 新しい技術, 方法論の開発を行うものである. 遺伝解析が非常に進んでいること, ゲノム長が比較的小さく(大腸菌の約17倍)その約80%はユニーク配列であること, などのC.elegansの特色を生かすべく, 昨年度にひきつづき, 染色体全体を順序づけられた組換体クローンでおおう新しい方法論の開発をおこなった.すでに, (i)十分な数のラムダファージクローンについて, 8種類の6塩基認識制限酸素の切断点地図を極めて高能率に作成し, 切断点のパターンをコンピューターで比較することにより, 重なり合うクローンを次々に見つけ出してconfig(重なり合ったクローンのグループ)に分類する. (ii)多数のファージクローンのプラークを高密度に作り, そのレプリカを多数とってconfigを橋わたしするクローンを効率よく探索する方法を開発した.モデル実験として大腸菌染色体に応用した. 総計3400クローンを調べた結果, 175〜1500Kbの7個のconfigに分類した. しかし, 最終段階では, クローン化されにくい領域があることなどのためにconfig間の配列決定が非常に困難になってくる. そこで, 各configの前方の制限酵素地図を染色体DNAについて直接作成する方法を開発し, config間の配列を最終決定し, 約4700Kbの制限酵素地図を完成させた.更に, 8塩基認識酵素切断点を含む, いわゆるlinkingクローンの新しい探索法を開発し, NotI, SfiIそれぞれ27, 32ヶ所の切断点をクローンのセット中に固定した. この方法は比較的簡便で, 大きなライブラリーでも比較的短時日のうちにすべてのlinkingクローンを得ることができる. パルスフィールドゲル電気振動などと組み合わせた新しいconfig配列決定法を考案しており, 線虫ゲノムへの応用も目指している.

In this study, C.elegans' growth process, functional analysis of the remaining subgroups, new technology, and methodology were analyzed. The remaining analysis is very small, the length is relatively small (coliform bacteria is about 17 times), the size is about 80%, and the size is high,などのC.elegansのcharacteristicsを生かすべく, last year's にひきつづき, The entire sequence of chromosomes is the sequence of the replacement body of the chromosomes. (i) Ten number of なラムダファージクローンについて, 8 types of 6-base recognition limit acid cut-off point ground コをpole めて high-energy-rate production し, Cut off point of the cutting point,重なり合うクローンを时々に见つけ出してconfig(重なり合ったクローンのグループ)にcategoryする. (ii) Many high-density のファージクローンのプラークをhigh-density products, そのレプリカを多とってconfigをbridge わたしするクローンをefficiencyよくExploration method をOpen 発した. モデル実験としてE. coli chromosome に応用した.総综合3400クローンを动べた results, 175~1500Kbの7のconfigにClassificationした. しかし, final stage では, The field of クローン化されにくいがあることなどのためにconfig room arrangement decision is very difficult になってくる. そこで, Each config's forward restriction enzyme is limited to the chromosomal DNA, and the method is directly created. 8 塩 Basic recognition enzyme cutting point を Han む, いわゆるlinking クローンの新しいExploration method を开発し, NotI, SfiIそれぞれ27, 32. The cutting point of 32 is fixed in the cutting point. The method is relatively simple. 大きなライブラリーでもComparative short-term day のうちにすべてのlinkingクローンをgetsることができる.パルスフィールドゲルElectric vibration などとgroup み合わせた新しいconfig allocation decision method を开户しており, Nematode nematodes are used to refer to worms.