あたらしい染色性walking法の開発

新型步行染色方法的开发

• 批准号: 61580219
• 负责人: 小原 雄治
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61580219/
• 关键词: 染色体walking; 染色体ライブラリー; ラムダファージベクター; 制限酵素地図; 大腸菌; オーバーラップクローン; アガロースゲル電気泳動; コンピューター探索

1.染色体ライブラリークローンソーティング法の開発:十分な数のライブラリークローンの制限酵素地図を作成し、そのパターンから重なり合うクローンを次々に見出し、染色体全体にわたるクローンのセットを作成するという、新しい染色体wclking法の開発を種々のステップについて行なった。(1)極微量のクローンDNA調製法:ベクターにラムダファージを用い、ファージの増殖・DNAの抽出などのすべての操作を96六マイクロタイターブレート上で行うことにより、数千クローンのDNAを短時日に調製する方法を開発した。 (2)部分分解を用いる多数のクローンの制限酵素地図を高能率に決定する方法:クローンDNA試料中のDNA濃度を担体DNAによって一定にすることにより、種々の6塩基認識制限酵素の安定な部分分解条件を設定した。1000クローンの制限酵素地図を4週間程度で作成しうるゲル電気泳動のシステムを作成した。 (3)制限酵素地図の作成・重なり合うクローンの探索のためのコンピュータープログラムの開発:デジタイザー、パソコン端末(本研究費で購入)、大型計算機を用いるシステムを開発した(神戸大学・磯野教授の協力を得た)。2.大腸菌染色体DNAの物理地図作成への応用:本方法の検討を行うためのモデル実験として、大腸菌染色体DNA(約4700キロ塩基対(kb))のライブラリーを解析した。約1000個のランダムに拾い上げたライブラリークローンについて8種の制限酵素地図を作成し、コンピューターに入力した。これを上記の方法で並べかえた結果、72のグループに分かれた。この段階で各グループ間のギャップは非常に小さいと見積もられたので、追加の2000クローンを高密度に接種するプラークハイブリダイゼーション法を開発し、グループをつなげていった。その結果、4700kbのほぼ完全な物理地図を作成した。

1.Chromosome analysisラリークローンのRestricted enzyme ground 図をし、そのパターンから重なり合うクローンを时々に见出し、Chromosome all にわたるクローンのセットを成するという, the new chromosome wclking method is open to the outside of the skin. (1) Very small amount of DNA preparation method: ベクターにラムダファージを use い, ファージの multiply and extract DNA などのすべてのThe operation of the を96 六マイクロタイターブレート上で行うことにより, thousands of クローンのDNAをshort-time daily modulation する method を开発した. (2) Partial decomposition method using a large number of restricted enzymes to determine the high energy rate: DNA in the DNA sample The concentration of the carrier DNA is certain, the species is stable and the partial decomposition conditions of the restriction enzyme are set. 1000 クローンのRestricted enzymes are produced in a 4-week period. (3) Restricted enzyme production and explorationためのコンピュータープログラムの开発:デジタイザー、パソコンTerminal (purchased with this research fee), and the large-scale computer used by いるシステムを开発した (Kobe University, in collaboration with Professor Isono). 2. Use of the physical method of producing coliform chromosomal DNA: This method is usedして, Escherichia coli chromosomal DNA (approximately 4700 kb) was analyzed. Approximately 1,000 のランダムに Pick up げたライブラリークローンにつIt is made of 8 kinds of restricted enzymes and is made of コンピューターに入力した. The result of the method mentioned above is the combination of the method and the result of the 72 points.この级でeachグループのギャップはvery smallさいと见 accumulateもられたので、Additionalの2000クローThe high-density inoculation method of high-density inoculation is the same as that of high-density inoculation.そのRESULT, 4700kbのほぼcompletely physically created した.