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核磁気共鳴によるカルモデュリン及びトロポニンCの高次構造の解明

通过核磁共振阐明钙调蛋白和肌钙蛋白 C 的高级结构

基本信息

批准号：
62220001
负责人：
引地邦男
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

トロポニンC(TnC)について, 2次元NMRを用いてアミドプロトン及びαプロトンのシーケンシャルアサインメントを試みた. Cドメイン及びNドメインのカルシウム結合部分のGlyを含むいくつかの残基が帰属された. Ca^<2+>結合状態でCドメインの2つのCa^<2+>結合部位の間にβ構造があり水素結合が2つあることがわかった. Nドメインについてはアポ状態で, 対応する部分にβ構造と水素結合が2つあることがわかった. Mg^<2+>イオン結合について調べた. 従来, Mg^<2+>はCドメインのみに結合するといわれていたが, Mg^<2+>滴定によるNMRスペクトルの変化からは両ドメインに結合することがわかった. 結合部位はMg^<2+>-Ca^<2+>2重滴定でCa^<2+>結合部位と同一であることがわかった.カルモデュリン(CaM)については, マストパラン(MP)及びミオシン軽鎖キナーゼのアナログであるM13の結合を調べた. Ca^<2+>の代わりにCd^<2+>を用いCd^<2+>のNMRスペクトルを測定した. MPあるいはM13が存在していない状態でCaMにCd^<2+>を加えると, 最初の2モルまでの間に2本のCd^<2+>シグナルが現れ, さらに加えてもスペクトルに変化がなかった. 4モルのCd^<2+>が結合することが知られているので, Cドメインにはゆっくり交換しながら結合しており, Nドメインには速い交換をしていることを示している. MPが存在すると, Cd^<2+>の添加にともなって, 中間状態のピークが現れ, 最終的には4本のピークになった. M13存在下では, 最初から4本のピークが現れ, 両ドメインに結合していることを示している. MPあるいはM13が存在するとNドメインとCドメインの間に相互作用が生じることがわかった.

TnC (TnC) was used to detect the presence of TnC, TnC, TnC C and N are the residues of the binding moiety Gly. Ca^<2+> binding state C 2 Ca^<2+> binding site β structure. N Mg^<2+>- In the past, Mg ^<2 +> was determined by NMR spectroscopy. Binding site Mg^<2+>-Ca^<2+>2 retitration Ca^<2+> Binding site Same. The combination of M13 and CaM (CaM) can be adjusted by adjusting the combination of CaM (CaM) and MP (MP). The NMR spectrum of Cd ^<2 +> was measured when Ca ^<2 +> was used. MP: M13 exists in the state of CaM: Cd^<2+>. In the first two phases, Cd^<2+> is present, and in the second phase, Cd^<2+> is present. 4. The Cd^<2+> of the 4 elements is the same as the Cd ^<2+>. MP is present, Cd^<2+> is added, intermediate state is present, and final state is present. In the presence of M13, the original four elements are present, and the original four elements are combined. MP, M13, M14, M16, M17, M18, M19, M19, M19,