大腸菌テトラサイクリン排出系のエネルギー共役機構

大肠杆菌四环素外排系统的能量耦合机制

• 批准号: 62617503
• 负责人: 澤井 哲夫
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 1988
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62617503/
• 关键词: テトラサイクリン; 耐性; 抗生物質; 能動的排出; マグネシウム排出; コバルト排出; 反転膜小胞; 大腸菌; TnIO

細菌のテトラサイクリン(TC)耐性は、能動的排出によるという点できわめて特異な耐性である。本研究は、TC輸送の分子機構を明らかにすることを目的としている。既に前年度において、TCはH^+との1:1の逆輸送であり、電気的には中性な、主としてpH勾配により駆動される輸送系であることを明らかにした。しかし、TC分子は整理的環境下ではTH_2またはTHという中性または陰イオン型として存在することが知られており、もしH^+との逆輸送系であれば、その輸送過程は電気的に中性ではなく、少なくとも2個の正味の電荷の移動を伴う筈であり、観察された事実と矛盾する。我々は、第3のイオンが共輸送されている可能性を検討した。TC輸送系の活性にはMg^<2+>が必須であり、Co^<2+>は更に効率よくTC輸送を活性化するが、Cd^<2+> Mn^<2+> Zn^<2+>などは無効である。そこで60Co^<2+>の輸送を測定した所、TC耐性蛋白TetAに仲介されて、TCの輸送と共役したCoの輸送が認められた。Mg^<2+>またはCo^<2+>存在下では、TCは中性付近の溶媒中で、THMg^<+>またはTHCo^<+>という一価カチオンとして存在することが知られている。TetAにより輸送される分子が一価カチオンであればH<+>との交換により電気的中性となり、エネルギ-共役実験の結果と一致する。次に、THMg+とH+の技薬輸送の素過程を明らかにするため、基質結合部位またはエネルギ-共役部位に欠損を持つTetA蛋白を産生する変異株の単離を試みた。いくつかのTC耐性遺伝子の共通配列からTC結合部位と予想されている領域の近傍にあるEcoRVサイト付近に約100bp欠失を導入したところ、TetA蛋白が産生されているにもかかわらずTC感受性となる菌株が得られた。次年度においては、この変異株の性質を調べるとともに、更にエネルギ-共役部位と考えられているC末側ドメインに欠失を持った変異株を調製する。

The bacteria's specific tolerance is the resistance to active excretion. The molecular mechanism of TC transport was studied. In the past year, the TC was H^+ and the 1:1 reverse transport system was neutral, the main pH was adjusted, and the transport system was bright. In the environment of molecular arrangement, TH_2 and TH are neutral, negative and negative, and the transport process of TH_2 and TC is neutral, negative and negative. We are discussing the possibility of a third party's co-transmission. The TC transport system is activated by Mg^<2+>, Co^<2+>, Mn^<2+>, Zn^<2+>, Co^<2+> and Co ^<2+>. 60Co^<2+> transport assay, TC resistant protein TetA mediation, TC transport assay, Co transport assay In the presence of Mg^<2+>, Co^<2+>, THMg ^<+>, THCo ^<+>, THCo ^<2 +>, THMg^<+>, THCo ^<+>, THCo ^<2 +>, THMg^<+>, THCo ^<+>, THMg^<2 +>, THCo ^<2 +>, THMg^<2 +>, THCo^<+>, THMg^<2 +>, THCo ^<2 +>, THMg ^<2 +>, THCo^<+>, THCo ^<2 +>, THMg ^<2 +>, THMg ^<2 +>, THCo ^<2 +>, THMg ^<2 +>, THCo ^<2 +>, THCo TetA is a transport molecule. It's a neutral molecule. In addition, THMg+ and H+ protein transport process is clear, matrix binding site is short, TetA protein production is short, and different strains are isolated. TetA protein was produced in a TC-susceptible strain by introducing a 100bp deletion in the vicinity of the TC-resistant strain and by inserting a 100bp deletion in the vicinity of the TC-resistant strain. In the next year, the characteristics of different plants were adjusted.

项目成果

Yamaguchi et al.: J.B.C.

山口等人：J.B.C.