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白血病細胞における癌遺伝子の相互作用

白血病细胞中癌基因的相互作用

基本信息

批准号：
63015017
负责人：
高久史麿
金额：
$ 6.02万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至 1990
项目状态：
已结题

项目摘要

骨髄異型性症候群(Myelodysplastic syndrome,以下MDS)は主に高令者をおかし,血液学的に末梢血の汎血球減少と骨髄の異型を伴う正〜過形成像を主徴とする予後不良な疾患である。我々は既に,本症患者骨髄細胞DNAをNIH3T3細胞に遺伝子導入した後,悪性形質転換をヌードマウスにおける腫瘤形成能により検定し,本症患者骨髄中に,N-rasがん遺伝子コドン13における点突然変異がしばしば観察されることを報告した。このin vivo selection assayは活性化がん遺伝子を非常に高い感度で検出するが,操作が非常に煩雑で時間を要するため,多数の検体を調べることは困難であった。そのため,本年度は、ポリメレース・チェーン・リアクション(PCR)とオリゴヌクレオチド・ハイブリダイゼーションを組みあわせて,MDS症例の骨髄細胞中におけるN-rasの点突然変異の有無を検討した。N-rasがん遺伝子はそのコドン12,13,61における点突然変異により活性化を受けることが知られているので,上記の領域を含むような範囲の両端のプライマーを用意し,患者骨髄DNAに加えて,Taq ポリメレースによりPCR法で,当該領域を選択的にin vitroで遺伝子増幅した。これをフィルターにドット・ブロットし,それぞれのコドンの点突然変異を出しうるようなオリゴヌクレオチド・プローブでハイブリダイゼーションした。本法により,患者骨髄細胞中に1%の点突然変異をもつ細胞が存在すれば,それを同定することができた。19例,のべ21検体のMDSについて検討した所,RA(refractory anemia)の一例,RAEB in T(refractory anemia in transformation)の一例そして,MDSより急性白血病へ進行した一例において,それぞれコドン61,12,61における点突然変異が同定された。以上より,点突然変異のおこる位置とMDS,急性白血病の間には何ら相関がないことが推定され,また,本法はその簡便性と高い検出感度により,前白血病状態の患者の経過観察に有用であると考えられた。

Myelodysplastic syndrome (MDS) is characterized by high levels of peripheral blood pancytopenia and abnormal bone formation. In this study, we reported that after DNA transfer into NIH 3T3 cells, the tumor formation ability of N-ras in bone marrow cells of patients with this disease suddenly changed. This in vivo selection assay is very sensitive, and the operation is very difficult. This year, we will discuss the sudden change of N-ras in bone marrow cells of MDS patients. N-ras gene mutation is detected at 12, 13 and 61 points, and the activity of N-ras gene mutation is detected at 12, 13 and 61 points. The activity of N-ras gene mutation is detected at 12, 13 and 61 points. All of the above mentioned items are subject to change at any time. This method, the patient bone marrow cells in 1% of the point suddenly changed the existence of cells, so that the same time 19 cases, including 21 cases of MDS, one case of RA(refractory anemia), one case of RAEB in T(refractory anemia in transformation), one case of MDS with acute leukemia, and one case of MDS with acute leukemia. The method is simple and highly sensitive, and useful in the examination of patients with pre-leukemic status.