权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

癌化に伴うアルドラーゼアイソザイムの発現転換現象の解析

与癌变相关的醛缩酶同工酶表达转化分析

基本信息

批准号：
63015068
负责人：
向井常博
金额：
$ 1.41万
依托单位：
National Cardiovascular Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

正常肝で強く抑制されているA型アルドラーゼ遺伝子AHリーダーエクソンが肝癌で強く発現する機構を明らかにするために、AHリーダーエクソンの制御調節領域の解析を行った。そのために上流3キロ塩基をもつ遺伝子にレポーター遺伝子としてCAT遺伝子を接続し上流の解析を行った。宿主としてHepG2細胞を用いたところ、上流から-314塩基対までの欠失変異体には活性の強さに変化が認められなかったが-198塩基対対までの変異体ではCAT活性の強さが約1/5に低下し、さらに-106まで欠失したところ活性はほとんど検出できなかった。以上の結果から-314と-198塩基間、-198と-106塩基間の間に発現を調節するDNAエレメントが存在することが予想された。そこで先ず-314〜-198塩基間の116塩基対のDNAを標識し種々の核抽出物を用いてゲルリタデーションアッセイを行ったところ2本のバンドが観察された。ついで得られたバンドの各核抽出物による違いを観察したところ、胎仔期の分化段階ではmajorバンドは15、16日目で強く出現したものの20日目、成体ではバンドは観察されなかった。一方HepG2、AH60cなどの肝癌ではmajorバンドは同様に観察されたがその移動度は胎仔期とは若干異なることがわかった。一方B型アルドラーゼ遺伝子も同様に調節領域を明らかにするために各制限酵素の切断部位を利用して欠失変異体を作成した。ラット肝初代培養細胞に感染させた各欠失変異体の解析を行ったところ、転写開始点より上流166塩基内に組織特異性を決定するDNAシスエレメントが存在することがわかった。

Normal liver is strong and suppresses liver cancer. Type A liver cancer is strong. The current organization is the analysis of the control and regulation field.そのために上流 3キロ塩基をもつ伝子にレポーター伝子としてCAT 伝子を continued 続し上流のanalytic を行った. The host HepG2 cells were used, and the host was HepG2 cells.までの无椉variantにはActivityの强さに変化がcognizeめられなかったが-19 8. The strong CAT activity of the allogeneic body is about 1/5 and low.さらに-106まで不了したところActive はほとんど検出できなかった. The above results show that the existence of DNA-based DNA and the existence of -198と-106-106 radicals and the existence of the DNA are not the same.そこで前ず-314~-198婩间の116塩対のDNAをLOGO しkind々のnuclear extraction物を用いてゲルリタデーションアッセイを行ったところ2本のバンドが観看された.ついで得られたバンドのeach nuclear extract によるviolation いを観看したところ、differentiation stage of fetal stage ではmajo rバンドは 15th and 16th day でstrong く appears したものの 20th day, adult ではバンドは観看されなかった. On the one hand, HepG2, AH60c and liver cancer are all the same as the liver cancer. One of the B-type アルドラーゼ弝子も同様にadjusting fields is made by using the cut-off parts of each restriction enzyme.ラットLiver primary cultured cells infectionさせたeach owes the loss of allogeneic analysisを行ったところ、転写start pointより上The tissue specificity of the flow 166 gene determines the existence of DNA and DNA.