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アルドラーゼ欠損症の遺伝生化学的研究

醛缩酶缺乏症的遗传和生化研究

基本信息

批准号：
60227015
负责人：
向井常博
金额：
$ 0.83万
依托单位：
佐賀医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-60227015/
关键词：
アルドラーゼ溶血性貧血

项目摘要

アルドラーゼ欠損でおこる先天性疾患、アルドラーゼA型欠損症、B型欠損症の原因を明らかにすべく、本年度は正常ヒトB型ゲノム遺伝子の構造解析と、ヒトA型アルドラーゼ欠損症の解析を行なった。先ずB型ゲノム遺伝子を解析するために、すでに得ているB型cDNAをプローブに用いて、R.Lawnらにより作成されたヒトDNAライブラリーをスクリーニングし、7個のクローンを得た。得られたクローンの制限酵素地図作成、B型cDNAとのサザーン・ハイブリダイゼーションによりこれらのクローンはcDNAの5′端から3′端までカバーシ、イントロンーエクリン構造をもつ遺伝子であることが推定された。そこで5′隣接領域1,000ベース、3′隣接領域200ベースを含む、遺伝子の全エクソン部分とそれに接するイントロンの一部の塩基配列を決定した。その結果遺伝子は全長15キロベースにおよび、9つのエクソンからなっていることがわかった。ついで転写開始点をSlマッピングにより決定したところ、3ヶ所存在することがわかった。次にA型欠損症の解析であるが、三輪らの報告した溶血性貧血を伴った赤血球アルドラーゼ欠損症の解析を行なった。赤血球ではA型が発現していることがわかっているので、先ず患者リンパ球の形質転換を行い、遺伝子の供給を容易にすべく株化を試みた。株化したリンパ球から粗抽出液を調製し、セルロースアセテート膜による電気泳動を行なったところ、正常と較べて明らかに活性は低く、しかも抽出液の熱処理により活性はほとんど検出できなくなることがわかった。これらは患者赤血球でみられた結果と一致した。一方RNAを抽出しノーザンブロッティングを行い、A型mRNAはコントロールと較べて、サイズは同じであるが含有量がヤヤ少い結果が得られた。今後cDNAクローニングも含めて、変異部位を同定する予定である。

The causes of congenital diseases, type A defects and type B defects are clarified, and the structural analysis of normal type B defects and type A defects is carried out this year. First, the B-type cDNA sequence was analyzed and seven different sequences were obtained. The restriction enzyme was constructed and the B-type cDNA was putative from the 5′ end to the 3′ end of the cDNA. 5′ contiguous domain 1,000 pixels, 3′ contiguous domain 200 pixels, all pixels. The fruit is full length 15ついで転写开始点をSlマッピングにより决定したところ、3ヶ所存在することがわかった。Analysis of Type A Deficiency and Hemolytic Anemia Associated with Hemolytic Deficiency A type of erythrocytes can be detected in a variety of ways, such as in a variety of ways, in a variety of ways, and in a variety of ways. Since the crude extract is prepared from the crystalline sphere and the electric current flows through the cell membrane, the activity is low under normal conditions and relatively bright conditions, and the activity is no longer detected during heat treatment of the extract. The patient's red blood cells are consistent. The expression of type A mRNA was detected by PCR. From now on, cDNA fragments will be identified.