Fluoreszenzspektroskopie an individuellen Hämocyaninmolekülen zur Untersuchung von sauerstoffabhängigen Konformationsänderungen

Die Form der Komberkation zwischen den Untereinheiten in kooperativen，multimeren Makromolekülen wie z.B.四聚血红蛋白是一个问题，这是一个很大的问题。这位法国科学家的实验仅仅是对韦尔登的研究，他提出了近几年来的一种新的方法，即对蛋白质复合物的协同作用的研究。Die dadminierzielte Eliminierung der Ensemblemittelung sollte es ermöglichen，zwischen konzentrierten und sequentiellen Mechanismen für die Konformationsübergänge zu unterscheiden.一个理想的蛋白质模型是24-mere Hämocyanin der Vogelspinne Eurypelma californicum。这是一种操作性很强的24分子Sauerstoff，它与一种200 Tryptophane亲24分子线性相关的光强度的Abfall相结合。通过分析发现，固定化蛋白复合物是通过局部高通量检测韦尔登而获得的。Das Mikroskop is für die nichtlineare 2-Photonen-Anregung konzipiert，um die Schwierigkeiten bei der direkten Anregung im UV-Bereich zu umgehen.

Die Form der Kommunikation zwischen den Untereinheiten in kooperativen, multimeren Makromolekülen wie z.B. dem tetrameren Hämoglobin ist ein Problem, das seit Jahrzehnten intensiv diskutiert wird. Während diese Frage bisher experimentell nur am Ensemble von Proteinmolekülen untersucht werden konnte, erlaubt die technische Entwicklung der letzten Jahre einen methodisch neuen Ansatz: die Untersuchung der kooperativen Wechselwirkung an einzelnen Protein-Komplexen. Die dadurch erzielte Eliminierung der Ensemblemittelung sollte es ermöglichen, zwischen konzentrierten und sequentiellen Mechanismen für die Konformationsübergänge zu unterscheiden. Ein ideales Modellprotein für unsere Untersuchungen ist das 24-mere Hämocyanin der Vogelspinne Eurypelma californicum. Es bindet 24 Moleküle Sauerstoff hochkooperativ, wobei die Bindung von Sauerstoff mit einem Abfall der Fluoreszenzintensität der etwa 200 Tryptophane pro 24mer linear korreliert. Zur Analyse einzelner, immobilisierter Protein-Komplexe soll die Fluoreszenz dieser intrinsischen Tryptophane mit einem lokal hochauflösenden Fluoreszenzmikroskop detektiert werden. Das Mikroskop ist für die nichtlineare 2-Photonen-Anregung konzipiert, um die Schwierigkeiten bei der direkten Anregung im UV-Bereich zu umgehen.