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蛋白質プライミングDNA複製を司るDNAポリメラーゼの機能ドメイン

控制蛋白质引发的 DNA 复制的 DNA 聚合酶功能域

基本信息

批准号：
63540506
负责人：
松本幸次
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Sophia University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

M2DNAポリメラーゼ(Pol)とプライマー蛋白質(PP)の精製標品を得ることを目的に両遺伝子をtacプロモーター下流にクローニングした。IPTG誘導後、数段階のカラムクロマトグラフィーにより均一標品を大量に入手することに成功した。この標品はPol:PP=1:1の複合体を形成し高い蛋白質プライミング活性を示した。これにより蛋白質プライミング機能をim vitroで測定する準備が整った。蛋白質プライミングDNAポリメラーゼの蛋白質プライミング機能ドメインを明らかにする目的の第一段階として、M2Polの塩基配列を決定した。推定されるアミノ酸配列(572残基)を基に、他のPolとの相同解析を行い基本構造の推定を試みた。近縁種のφ29Polと残基数は同じであり、82.3%の相同性を示した。相同解析の結果は大腸菌のPol Iをも含め多数のPolとの相同領域の存在を示した。M2・φ29のアフィディコリン耐性突然変異株は、そのPolのヌクレオチド類似物に対する感受性が変化することが判明した。これはHSVの例と同様でアフィディコリンの作用部位がヌクレオシド結合部位に近接していることを示唆している。突然変異株の塩基配列解析は相同領域DのC末端側に隣接する領域がM2・φ29のアフィディコリン感受性に係わることを明らかにした。またこの領域がヌクレオチド結合領域であることはPol Iの相同領域Dとの一致からも支持される。相同解析は蛋白質プライミング機能に特異的な領域は見出されず、他の通常のPolとの共通領域が、全体に広く分布していることを示した。よって蛋白質プライミング機能に特異的な大きなドメイン構造が存在する可能性は低いと推定される。今後、この一次構造の基礎情報をもとにM2・φ29間のキメラの作製、in vitro突然変異導入等の手法により、蛋白質プライミングに係わる機能を明らかにする計画である。

M2DNA purification standard (Pol) and protein purification standard (PP) After IPTG induction, a number of steps were taken to obtain a uniform standard. The standard product showed high protein activity by forming complexes with Pol:PP=1:1. The protein level was measured in vitro. The first stage of protein expression is determined by the sequence of M2Pol. The putative acid sequence (residue 572) was determined by the same method as the putative acid sequence. The φ29Pol and residue numbers of recent species are the same, with an identity of 82.3%. The results of the same analysis show that most of the Pol I in the same field exist. M2·φ29 is sensitive to sudden changes in plant resistance and Pol's resistance to changes in plant resistance. This is the case with HSV. The site of action of HSV is close to the binding site. Analysis of gene alignment of mutant plants: M2·φ29 and M2·φ29 are adjacent to each other in the same domain D. This domain is supported by a combination of domains. The same analysis of protein expression function in specific areas is not found, his general Pol and common areas, the overall distribution of these areas is shown. The possibility of existence of a functionally specific protein construct is low and presumptive. In the future, the basic information of this primary structure will be changed from M2 to φ29, and the function of protein conversion will be clarified.