蛋白質プライミングDNAポリメラ-ゼのプライミング機能領域

蛋白质引发 DNA 聚合酶的引发功能区

• 批准号: 02640497
• 负责人: 松本 幸次
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Sophia University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02640497/
• 关键词: DNAポリメラ-ゼ; 蛋白質プライミング; アフィディコリン耐性突然変異; dNTP結合領域; DNA複製; ファ-ジφ29とM2

φ29DNAポリメラ-ゼ(pol)遺伝子の発現プロモ-タ-下流へのクロ-ニングとpolの精製:ファ-ジM2ではpolをtacプロモ-タ-下流にクロ-ニングし、polを大量精製することに既に成功している。本研究はφ29pol遺伝子をT7φ10プロモ-タ-下流に連結しpolの大量精製を実現した。20lの大腸菌培養から約20mgの精製φ29polを得た。精製標品はX線結晶回折による三次元構造解析のためD.Ollis教授(米国North western大)に送付した。dNTP認識領域:アフィディコリン耐性突然変異株15株を新らたに分離した。これらはアフィディコリンに対する耐性の度合から4つの群に分類された。いづれの耐性株もホスホノ酢酸、araC、araA等のヌクレオシド類似体に対する感受性が変化しdNTP認識領域とアフィディコリン認識領域の重複が明らかとなった。既に3株の突然変異座を決定。蛋白質プライミング機能領域:T7φ10プロモ-タ-下流に連結したφ29、M7の両Pol遺伝子にCOOH末端側から欠失を導入した実然異株を作成。精製した欠失型Pol(20〜100アミノ酸を欠失)は、いづれもプライマ-蛋白質と結合できないことがグリセロ-ル密度勾配遠心による分析により明らかになった。これら欠失型polは蛋白質プライミング活性を欠いており、C末端側にあるプライマ-蛋白質結合領域が、蛋白質プライミング機能に必須の領域であることが示された。φ29polの転写後発現抑制:φ29pol遺伝子は大量発現系として安定なクロ-ンの入手が困難であった。同一転写単位上でpol遺伝子の下流にある遺伝子1を欠失させることにより、polの大量発現が可能となることを見出し、polの発現は転写後の過程で遺伝子1産物により抑制されることを明らかにした。

The production of φ29DNA fragments from the downstream of the molecule was successfully carried out. In this study, the purification of large quantities of 29pol molecules was realized. 20l of coliform culture is about 20mg of refined φ29pol. The refined standard is presented by Professor D.Ollis (North Western University of the United States). dNTP recognized the field: 15 new strains isolated from 15 new strains This is the first time I've ever seen a woman who's had sex with someone else. The sensitivity of the resistant strains such as acetic acid, araC and araA to the change of dNTP recognition domain and the duplication of dNTP recognition domain Both three plants suddenly changed their position. Functional domain of protein:T7φ10 φ29 φ 10 Refined Pol(20 ~ 100 g/L) is a protein binding protein. The protein binding domain of the deficient pol is the domain of protein binding activity, and protein binding activity.φ 29 pol is difficult to start with. In the same writing unit, the downstream of the pol gene is missing, the occurrence of pol in large quantities is possible, and the occurrence of pol is suppressed in the process after writing.

项目成果

M.NOMURA,K.MATSUMOTO,H.HIROKAWA: "Aphidicolinーresistant mutants of bacteriophage φ29:Analyses with phosphonoacetic acid and arabinosyl analogs."

M.NOMURA、K.MATSUMOTO、H.HIROKAWA：“噬菌体 φ29 的阿菲迪霉素抗性突变体：用膦酰乙酸和阿拉伯糖基类似物进行分析。”

K.MATSUMOTO,A.TAKEUCHI,H.HIROKAWA: "Region for proteinーpriming function of φ29 and M2 DNA polymerases"

K.MATSUMOTO、A.TAKEUCHI、H.HIROKAWA：“φ29 和 M2 DNA 聚合酶的蛋白质启动功能区域”

H.KOBAYASHI,K.KITABAYASHI,K.MATSUMOTO,H.HIROKAWA: "Primer protein of bacteriophage M2 exposes the RGD receptor site upon linking the fierst deoxynucleotide" MOL.GEN.Genet.

H.KOBAYASHI、K.KITABAYASHI、K.MATSUMOTO、H.HIROKAWA：“噬菌体 M2 的引物蛋白在连接第一个脱氧核苷酸后暴露了 RGD 受体位点”MOL.GEN.Genet。

K.MATSUMOTO,CH.I.KIM H.KOBAYASHI,H.KANEHIRO H.HIROKAWA: "Aphidicolinーresistant DNA polymerase of bacteriophage φ29 APH^r71 mutant is hypersensitive to phosphonoacetic acid and butyl phenyldeoxyguanosine 5'ーtriphosphate" Virology. 178. 337-339 (1990)

K.MATSUMOTO、CH.I.KIM H.KOBAYASHI、H.KANEHIRO H.HIROKAWA：“噬菌体 φ29 APH^r71 突变体的阿菲迪霉素抗性 DNA 聚合酶对膦酰乙酸和丁基苯基脱氧鸟苷 5-三磷酸过敏”病毒学 178。 337-339 (1990)

H.KOBAYASHI,K.KITABAYASHI,K.MATSUMOTO,H.: "RGD receptor sequence in the terminal protein of bacteriophage M2" Virology.

H.KOBAYASHI,K.KITABAYASHI,K.MATSUMOTO,H.：“噬菌体 M2 末端蛋白中的 RGD 受体序列”病毒学。