OGR1オルソログを利用した微量金属特異性を感知するOGR1のアミノ酸配列の決定

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OGR1は細胞外pHの低下によって活性化するプロトン感知性GPCRである。これまでのOGR1の研究は、がん組織などpHが低下している組織で精力的になされてきた。一方、ヒト、マウスのOGR1が、プロトンに加えて微量金属によっても活性化される金属感知性GPCRであることが2015年に見いだされた。本研究では「OGR1が、いままで不明であった微量金属の感知、制御を司る分子であるのか、またそうであるのならOGR1は生理的、病態生理的にどのような機能を担っているのか」を実験及び解析により解明するため、まず「OGR1オルソログ間のキメラ受容体を利用して、金属の特異性を決定するOGR1のアミノ酸配列」を特定することを目的としている。本年度は、ヒトOGR1とラットOGR1間でのOGR1応答の比較解析を行った。OGR1の活性化は、HEK細胞に各OGR1を発現させ、OGR1の活性化の程度をレポーターアッセイの測定系を用いて測定した。そして各OGR1の活性化応答のEC50値を測定し、応答性の違いを定量化した。その結果、ラットOGR1はヒトOGR1と比べて、微量金属刺激による応答が右にシフトしていた。そこでこのシフトにラットOGR1のどの領域が関与しているのかを次に調べた。ヒトとラットOGR1間でキメラ受容体を作成した。そしてこのキメラ受容体の微量金属刺激による活性化を測定した結果、ラットの細胞外領域をもつキメラ受容体で活性化応答の減弱が観察された。この結果は、種特異的な活性化を司るアミノ酸配列がOGR1の細胞外領域に存在する可能性を示唆している。