気道上皮細胞の分化増殖と高分子糖蛋白分泌(in vitroにおける粘液分泌の新しい評価法)

气道上皮细胞的分化、增殖和高分子量糖蛋白的分泌（体外评估粘液分泌的新方法）

• 批准号: 06672187
• 负责人: 宮田 健
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06672187/
• 关键词: 気道上皮細胞; 粘液分泌; 高分子糖蛋白; 杯細胞; プロテインキナーゼ

本研究では,細胞レベルにおいて粘液分泌を誘発する要因を明らかにするために,in vitro杯細胞モデルとしてハムスター気管上皮細胞(HTEcell)培養系を用い,HTEcellからの粘液放出に対する刺激応答性について,基礎的な検討を行った.その結果,以下の成績ならびに結論を得た.1.HTE cellからの高分子複合糖質(HMWG)の基礎放出は,少なくとも2時間までは直線性を示し,また,放出された高分子物質は,ヒアルロニダーゼに低抗性を示し,アルカリ処理により低分子化された.このことから,HTEcellは気道粘液と生化学的に類似した高分子複合糖質で安定して放出することが示された.さらに,HTE cellのHMWGの放出活性は,既存の促進物質ATPおよびPMAによって促進され,その放出は薬理学的に修飾が可能であると考えられた.2.HTEcellのHMWG放出は,低pHおよびCa^<2+>・Mg^<2+>-freeの培養液中にて上昇し,低浸透圧および高浸透圧の培養液中にて低下した.このことは,培養液中のpH,浸透圧およびCa^<2+>,Mg^<2+>濃度の変化,すなわち物理的・化学的刺激によって調節されていることが示唆された.3.HTEcellのHMWG放出は,器械的振盪刺激に対し,150〜300rpmにおいて振盪速度に依存した促進作用を示した.この放出促進作用は,可逆的であり,また,細胞傷害性を伴わないことより機能的な反応であると考えられた.4.器械的刺激により誘発されたHMWG放出の経時的な解析より,この放出促進が一過性の反応であると考えられた.また,細胞内Ca^<2+>chelatorBAPTA-AM(3μM)ならびにprotein kinase inhibitor staurosporine(10nM)によって,器械的刺激によるHMWG放出が消失したことから,HTEcellの器械的刺激応答に細胞内Caイオンおよびprotein kinaseの関与が示唆された.

In this study, we investigated the essential factors for the induction of mucus secretion in vitro cell cultures and the response to stimulation of mucus secretion in vitro cell cultures. The results are as follows: 1. HTE cell release of HMWG is linear at low time, and the release of HMWG is linear at low time. HTE cells are similar to mucus and biochemistry in that they are stable and release carbohydrates. 2. The HMWG emission of HTE cells increased in culture medium with low pH and Ca^<2+>·Mg^<2 +>-free, and decreased in culture medium with low osmotic pressure and high osmotic pressure. The pH, osmotic pressure, Ca^<2 +> and Mg^<2+> concentrations in the culture medium were regulated by physical and chemical stimuli. 3. The HMWG emission from HTE cells was stimulated by mechanical oscillation, which was dependent on the oscillation speed from 150 to 300rpm. 4. Stimulation of the apparatus induced the release of HMWG. In addition, intracellular Ca^<2+>chelatorBAPTA-AM(3μM) and protein kinase inhibitor staurosporine(10nM) were detected, and HMWG emission disappeared in response to mechanical stimulation.

项目成果

宮田 健: "機能形態学(鶴藤丞編)" 南江堂, 412 (1995)

Ken Miyata：“功能形态学（由 Tsuru Tsuruto 编辑）” Nankodo，412 (1995)

K.Yoshitake,T.Miyata et al.: "Elastase participates to mucus hypersecretion in tracheal epithelial cells co-cultured with activated polymorphonuclear leucocytes" Jpn.J.Pharmacol.67. 314- (1995)

K.Yoshitake、T.Miyata 等人：“弹性蛋白酶参与与活化的多形核白细胞共培养的气管上皮细胞中的粘液过度分泌”Jpn.J.Pharmacol.67。

H.Kai,T.Miyata,et al: "Invclvement of protein kinase C in mucus secretion by hamster tracheal epithelial cells in culture" Am.J.Physiol.(Lung Cell.Mol Physiol.). 267. 2526-2530 (1994)

H.Kai、T.Miyata 等人：“蛋白激酶 C 对培养的仓鼠气管上皮细胞粘液分泌的影响”Am.J.Physiol.(Lung Cell.Mol Physiol.)。

M.Okumura,T.Miyata,et al: "Effects of xanthine derivatives on phosphatidylcholine secretion in primary culture of rat type II pneumocytes" Jpn.J.Pharmacol.67. 165-168 (1995)

M.Okumura、T.Miyata 等：“黄嘌呤衍生物对大鼠 II 型肺细胞原代培养物中磷脂酰胆碱分泌的影响”Jpn.J.Pharmacol.67。

Y.Kamiide,T.Miyata et al: "Mechanical stimulation-induced mucus release from cultured hamster tracheal cells" Jpn.J.Pharmacol.67. 314- (1995)

Y.Kamiide、T.Miyata 等人：“机械刺激诱导培养的仓鼠气管细胞释放粘液”Jpn.J.Pharmacol.67。