大腸菌由来のRNA性因子によるインターフェロン誘発

源自大肠杆菌的 RNA 因子诱导干扰素

• 批准号: 63580160
• 负责人: 平 秀晴
• 金额: --
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63580160/
• 关键词: インターフェロン; 二重鎖RNA

我々はこれまで真核細胞発現用ベクターpSVを用いてセンダイウィルス遺伝子を細胞に導入しインターフェロン(IFN)誘発に関与する遺伝子の解析を行なってきた。この過程でpSVベクター及びその関連プラスミド標品中に微量に混在するRNA性因子が強力なIFN誘発活性及び細胞傷害活性を示すことを見い出した。このRNA性因子はpSV保持大腸菌をクロラムフェニコール処理によりプラスミドを増強させた時にのみ特異的に出現した。本研究はこのRNA性因子を精製しその化学的性質及びその起源を明らかにすることによりIFN誘発因子の成因を明らかにし、このRNA性因子を細胞質あるいは核へ直接注入しIFN誘発との相関を明らかにすることを目的としている。上記RNA性因子をIFN誘発活性を指標としてショ糖密度勾配遠心法等により精製した結果、約8Sの大きさを有すること、またRNase T_1、U_2、H、S1ヌクレアーゼでは失活せずdsRNAを特異的に切断するRNaseVIにより失活したことから二重鎖RNA構造を有することが明らかとなった。しかしRNaseAにより失活することから完全な二重鎖構造を有していないことも示唆された。RNA性因子の3末端を〔^<32>P〕-γ-ATPにより酵素的に標識することができた。〔^<32>P〕RNAの7M尿素存在下の8%アクリルアミド電気泳動像は200〜400塩基にわたる不均一なバンドでありIFN誘発活性のピークとほぼ一致していた。次に〔^<32>P〕RNA性因子をプローブとしてプラスミドpSV:pBR322、λファージ及び大腸菌HB101の染色体DNAとの相補性をサザンブロッティングにより解析した結果、大腸菌のDNAとのみ特異的にハイブリダイズしたことから、このRNA性因子が大腸菌遺伝子由来であることが示唆された。今後逆転写酵素等を用いてこのRNAの構造を明らかにしてゆく予定である。

We are interested in eukaryotic gene expression and gene analysis related to the introduction of interferon (IFN) into cells. This process was demonstrated by the presence of small amounts of RNA factors mixed in the pSV and related proteins, which showed potent IFN-inducing activity and cellular injury activity. These RNA factors maintain the presence of E. coli in a variety of ways, including: The purpose of this study is to clarify the chemical nature and origin of the RNA inducing factor. The above mentioned RNA factor IFN induction activity index, sugar density, alignment distance center, etc., refined results, about 8S of large RNA, RNase T_1, U_2, H, S1, etc., inactivated RNA, specific cut off RNase VI, inactivated RNA, double-locked RNA structure, etc. A complete double lock structure is possible when RNase A is deactivated. The 3-terminal region of the RNA <32>gene-γ-ATP is identified by the enzyme. 8% <32>of the electrophoretic images in the presence of [^ P] RNA and 7M urea were heterogeneous from 200 to 400 bases, resulting in consistent IFN-inducing activity. The <32>results of DNA complementarity analysis of E. coli HB101 and RNA gene expression in E. coli HB101 are as follows: In the future, reverse transcription enzymes will be used to construct RNA.

项目成果

H.Taira,et al: J.Interferon Research.

H.Taira 等人：J.干扰素研究。

H.Taira,et al.: J.Virology. 61. 625-628 (1987)

H.Taira 等人：J.Virology。