Funktionsanalyse der Wechselwirkungen von Phosphoinositid 3-Kinase gamma (PI3Kgamma) mit Ras und heterotrimeren G-Proteinen

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PI3Kg ist ein multifunktionelles Signalübertragungsprotein mit einer Lipidkinase- und einer Proteinkinaseaktivität auf. Innerhalb des DFG - Schwerpunktprogrammes analysieren wir die Wechselwirkungen von PI3Kg mit heterotrimeren G Proteinen und der kleinen GTPase Ras. Nach Untersuchungen unter in vitro - Bedingungen widmet sich der vorliegende Projektantrag dem Wechselspiel dieser Proteine in Zellen. Für diese Experimente sollen zwei Ansätze eingesetzt werden. Zur Analyse der Regulation von PI3Kg durch Agonisten G - Protein gekoppelter Rezeptoren sollen permeabilisierte neutrophile Granulozyten mit PI3Kg und den Bindungsproteinen p101, Raf oder/und MEK rekonstituiert werden. Die Signalübertragungsaktivitäten von PI3Kg, Ras, Raf und MEK sollen in An - und Abwesenheit extrazellulärer Agonisten gemessen werden. In einer zweiten Versuchsserie soll die Transfektionsmethode genutzt werden, um die spezifische Rolle von PI3Kg und Ras bei der Kontrolle intrazellulärer Signalwege und zellulärer Funktionen zu untersuchen.