Wechselwirkungen zwischen Domänen der archaeellen Transkriptionsmaschinerie und Vergleich mit dem eukaryotischen System

RNA 聚合酶 (RNAP) 是古生菌合成的真核 RNA 聚合酶，包括 mRNA、tRNA 和 rRNA。我们在第四章结构中了解了真核转录中的真核 RNA 聚合酶 II 的序列，我们还使用了真核转录下的模型系统。 Kürzlich haben wir die RNAP aus dem hyperthermophilen 古菌激烈火球菌 aus 11 重组体在体外重组。 Dabei konnte ein aus 9 Untereinheiten bestehendes katalytisch aktives Kernenzym und ein Subkomplex aus den Untereinheiten E´ und F identifiziert werden。真核RNAP II 中的Rpb7 和Rpb4 的E´und F 信同源物，是转录启动过程中的重要功能。 Mit Hilfe 重组系统可用于生物化学研究和突变研究分析。我关注 RNAP Zentrum 的活动、与 E´-F Subkomplex 的 Kernenzyms 的 Kontaktflächen、Sowie die Wechselwirkung der einzelnen Untereinheiten mit dem Transkriptions-Initiationsfaktor TFB。

Die RNA Polymerase (RNAP) der Archaeen synthetisiert im Gegensatz zu den spezialisierten eukaryotischen RNA Polymerasen sowohl mRNA, als auch tRNA und rRNA. Sie weist jedoch sowohl in ihrer Quartärstruktur als auch den Sequenzen ihrer Untereinheiten große Ähnlichkeiten zur eukaryotischen RNA Polymerase II aus der Hefe auf, weshalb sie ein vorzügliches Modellsystem zur Untersuchung der eukaryotischen Transkription darstellt. Kürzlich haben wir die RNAP aus dem hyperthermophilen Archaeon Pyrococcus furiosus aus 11 rekombinant hergestellten Untereinheiten in vitro rekonstituiert. Dabei konnte ein aus 9 Untereinheiten bestehendes katalytisch aktives Kernenzym und ein Subkomplex aus den Untereinheiten E´ und F identifiziert werden. Die Untereinheiten E´und F sind homolog zu Rpb7 und Rpb4 der eukaryotischen RNAP II, die dort eine wichtige Funktion bei der Transkriptionsinitiation übernehmen. Mit Hilfe dieses rekombinanten Systems können die Wechselwirkungen und Funktionen einzelner Untereinheiten durch biochemische Untersuchungen und Mutationsstudien analysiert werden. Im Fokus stehen dabei Strukturen im aktiven Zentrum der RNAP, die Kontaktflächen des Kernenzyms mit dem E´-F Subkomplex, sowie die Wechselwirkung der einzelnen Untereinheiten mit dem Transkriptions-Initiationsfaktor TFB.