大麦根の鉄ームギネ酸錯体の吸収リセプタ-遺伝子の構造決定

大麦根麦格酸铁复合物吸收受体-基因结构测定

• 批准号: 01560070
• 负责人: 森 敏
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 1990
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01560070/
• 关键词: ムギネ酸; 水性二層分配; ポリクロ-ナル抗体; モノクロ-ナル抗体; マウスハイブリド-マ; アフィニティカラムクロマトグラフィ-; リセプタ-遺伝子; 水性二層分配法; 吸収リセプタ-; 鉄欠乏植物

大麦根の鉄ームギネ酸錯体(Fe(III)ーMAs)の吸収リセプタ-遺伝子を釣り上げるために,二性二層分配法により分離したFe欠令大麦根細胞膜画分をSDSーPAGEで展開し,銀染色により,14,28,40KDeのペプチドバンドにFe処理区との間に差を認めた。そこでこの膜画分を再度二次元電気泳動して,両者の間でスポットの差を調べたが,顕著な差を示すスポットを見出すことができなかった。そこで今年は方針を変更し,まずムギネ酸類に対するモノクロ-ナル抗体を採り,これに対する抗抗体を作成し,それを用いて,Fe(III)ーMAs吸収リセプタ-遺伝子をスクリ-ニングすることとした。そのためにまず、MAs類に対する抗体の作成を行うこととした。このような低分子はBSAと結合して抗原としなければならないためMAsーBSA結合体を作成しようとしたが,反応基との関係でNA(ニコチアナミン)ーBSAを抗原として用い,そのあとMAsに対するモノクロ-ナル抗体をスクリ-ニングすることとした。NAーBSAに対するウサギのポリクロ-ナル抗体が得られ,抗体価はNA(100%),DNA(デオキシムギネ酸100%),MA(ムギネ酸82.8%)であったがepiHMA(エピハイドロキシムギネ酸)やHMA(ハイドロキシムギネ酸)に対してはゼロであった。現在マウスハイブリド-マから数種のNA抗体をもつクロ-ンを選抜している。将来は,抗NA抗体のアフィニティカラムで目的蛋白質を精製する予定である。

Sorption of Fe(III)-MAs from barley roots was studied by SDS PAGE. The results showed that Fe was separated from barley roots by two-layer partition method, and the difference between Fe treated areas and Fe treated areas was identified by silver staining at 14,28, and 40 K. The film is divided into two parts, namely, the second part and the third part. This year's policy changes include the acquisition of anti-Fe (III)-MAs and the production of anti-Fe (III)-MAs. In addition, the production of antibodies against MAs will be carried out. The low molecular weight BSA is bound to the antigen and the anti-BSA conjugate is prepared. The relationship between the anti-BSA conjugate and the antigen is discussed. NA BSA is responsible for all kinds of anti-body, anti-body NA(100%),DNA(100%),MA (82.8%), epiHMA(100%) and HMA(100%). Now, there are several kinds of NA antibodies. In the future, anti-NA antibodies will be purified.

项目成果

Shuichi Mihashi,Stoshi Mori: "Characterization of mugineic acid Fe transporter in Fe-deficient barley roots using the multicempurtment transport box method" Bilogy of Metals. 2:146-154. (1989)

Shuichi Mihashi，Stoshi Mori：“使用多量子转运盒方法表征缺铁大麦根中的麦根酸铁转运蛋白”金属生物学。

Mihashi S: "Enhancement of mugineic acidーFe^<3+> uptake by Feーdeficient barley roots in presence of excess mugineic acid in the medium" Plant and Soil. 129. (1990)

Mihashi S：“在培养基中存在过量麦根酸的情况下，提高麦根酸ーFe^<3+>的吸收”植物和土壤129。（1990）。

Shojima S: "Antiーnicotianamine antibodies crossーreacting with mugineic acid 2'ーdeoxymugineic acid" Soil Science and Plant Nutrition. 37. (1991)

Shojima S：“抗烟酰胺抗体与麦根酸 2-脱氧麦根酸发生交叉反应”《土壤科学与植物营养》37。（1991）

Shojima S: "Biosynthesis of Phytosiderophores" Plant Physiology. 93. 1497-1503 (1990)

Shojima S：“植物铁载体的生物合成”植物生理学。

Mori S: "Identification of rye chromosome 5R as a carrier of the ganes for MA synthetase and 3ーHMA synthetase using wheatーrye addition lines" Jpn.J.Genetics. 65. 343-352 (1990)

Mori S：“使用小麦-黑麦附加系鉴定黑麦染色体 5R 作为 MA 合成酶和 3-HMA 合成酶的载体”Jpn.J.Genetics 65. 343-352 (1990)。