ムギネ酸合成分泌の遺伝的制御によるFe欠乏耐性植物の創作

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ムギネ酸関連遺伝子のクロ-ニングのために以下のことを行なった。1.ムギネ酸合成系路を確定した。メチオニン→SAM(S-adens Sylmethiorune)→ニコチアナミン(NA)<-NH_2>___→Keto体<+OH>___→2'-deoxymugineic acid(DMA)という一連の経路を得た、結局Xチオニン3分子が縮合してDMAとなることを、in vitro系によって証明した。この際生じるKeto体と思われる中間差物は合成物がないので未同定である。次にDMA<+OH>___→MA(ムギネ酸)<+OH>___→epiHMA又はHMAと考えられるがこの反応のin Vitro 系には成功していない。今後はは今回の実験でアッセイ系が確立した。SAM→NAの合成酵素を純粋に單離し、このペプチドのN末端のシ-ケンスからムギネ酸合成関連の遺伝子群をクロ-ニングすることをねらっている。2.鉄欠乏関連遺伝子のクロ-ニング。未だムギネ酸関連遺伝子が何一つ單離されていないために、デファレンシャルハイブリダイゼ-ション法(Df法)により、鉄欠乏関連遺伝子をクロ-ン化した。すなわち、鉄欠乏大麦根のmRNAからcDNAライブラリ-を作成し、このライブラリ-から-Fe CDNAと+FeCDNAの差をとって、7つのFe欠乏に特異的に発現するクロ-ンを單離した。このDNAシ-ケンスと機能については今後の課題である。3.Fe欠乏特異蛋白の單離。Fe欠乏と対照区の大麦根から蛋白を抽出しこの二次元電気泳動上のスポットから、数コのFe欠乏に特異的に誘導されるペプチドを検出した。しかしこれらのペプチドのN末端はことごとくブロックされていた。現在ブロックされたペプチドのN末端分析法を検討している。