捕捉化合物を用いた平滑筋細胞内カルシウム動員機構の薬理学的研究

使用清除化合物进行平滑肌细胞内钙动员机制的药理学研究

• 批准号: 01570095
• 负责人: 飯野 正光
• 金额: $ 0.19万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 1990
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570095/
• 关键词: 平滑筋; 筋収縮; カルシウムイオン; イノシト-ル三リン酸; カルシウム動員機構; 捕捉化合物

今年度は昨年度に購入したキセノンフラッシュランプを用いてcaged化合物の光分解の試験と、cagedイノシト-ル三燐酸(caged IP_3)によるモルモット門脈平滑筋スキンドファイバ-からのCa放出を測定した。内径400μmのガラス毛細管をキュベットとして用い、蛍光Ca指示薬fluoー3によってCa濃度を測定した。蛍光強度を測定する方向と直交する方向からキセノンフラッシュランプによる強力な紫外光を照射して、キュベット内のcaged化合物の光分解を行った。Caged Ca(DMーnitrophen)を用いた結果では、100Jのフラッシュで約50%の光分解効率が得られた。キュベット内に平滑筋スキンドファイバ-を固定し、1ないし30μMのcaged IP_3に浸とうした後にフラッシュを行うとt_<1/2>が1秒前後の時間経過でCa増加が起こる。このCa濃度増加は、前もってCa取り込み処理を行わないと見えないので、平滑筋CaストアからのCa放出によるものであることがわかる。またこのCa放出には、S字状の時間経過が見られる。すなわち光分解直後はCa放出速度が遅いが、数百ミリ秒経ちCa濃度が増加してくるとCa放出速度が増大してくる。しかし、初めから溶液に適当量のCaを加えて、フラッシュ前の遊離Ca濃度を300nM程度に増加させておくと、S字状の時間経過は観察されず概ね指数関数的なCa放出が観測される。更にCaを加えてフラッシュ前のCa濃度を500nM以上にしておくとCa放出速度はかえって減少する。この様な結果からIP_3によるCa放出はCa濃度に依存し、300nM付近に至適Ca濃度が存在することが分かる。低Ca濃度でフラッシュを行うと、放出されたCaによって更にCa放出が促進されるためS字状の時間経過が得られるものと考えられる。この様にIP_3によるCa放出にはCaを介する正帰還経路が存在し、見かけ上非常に急峻なIP_3の用量反応関係が得られる。このことはIP_3によるCa放出が細胞内の限局した部分で起こり得ることを示している。

Our annual に は yesterday bought し た キ セ ノ ン フ ラ ッ シ ュ ラ ン プ を with い て caged compounds の photolysis の test と, caged イ ノ シ ト - three 燐 ル acid (caged IP_3) に よ る モ ル モ ッ ト portal smooth muscle ス キ ン ド フ ァ イ バ - か ら の determination of Ca release を し た. Inside diameter 400 microns の ガ ラ ス capillary を キ ュ ベ ッ ト と し て い, 蛍 Ca indicator light 薬 fluo ー 3 に よ っ て Ca concentration determination を し た. 蛍 light intensity を determination す る direction と rectangular す る direction か ら キ セ ノ ン フ ラ ッ シ ュ ラ ン プ に よ る powerful を な uv light irradiation し て, キ ュ ベ ッ ト within の caged compounds の light line を っ た. Caged Ca (DM ー nitrophen) を い た results で は, 100 j の フ ラ ッ シ ュ で about 50% の が unseen light decomposition rate to ら れ た. Within the キ ュ ベ ッ ト に smooth muscle ス キ ン ド フ ァ イ バ - を fixed し, 1 な い し 30 microns の caged IP_3 に leaching と う し た after に フ ラ ッ シ ュ を line う と t_ (1/2 > が の before and after 1 second time 経 で Ca rights and an が こ る. こ の Ca concentration rights は, former も っ て Ca take り 込 み 処 bedding line を わ な い と see え な い の で, smooth muscle Ca ス ト ア か ら の Ca release に よ る も の で あ る こ と が わ か る. Youdaoplaceholder0 が <s:1> <s:1> Ca releases に に, s-shaped <e:1> time passes が see られる. す な わ ち photolysis straight after は Ca release speed が 遅 い が, hundreds of ミ リ seconds 経 ち Ca concentration が raised し て く る と Ca release speed が raised large し て く る. し か し, early め か ら solution に appropriate amount の Ca を plus え て, フ ラ ッ シ ュ の free Ca concentration before を に raised 300 nm degree plus さ せ て お く と, S word の time 経 は 観 examine さ れ ず almost ね index number of masato な Ca release が 観 measuring さ れ る. Before にCaを is added to えてフラッシュ, the concentration of <s:1> Caを is above 500nM, the release rate of に ておくと ておくとCa decreases, and the release rate of を えって decreases. こ の others な results か ら IP_3 に よ る Ca release は に Ca concentration dependent し, pay nearly 300 nm に exist to optimum concentration of Ca が す る こ と が points か る. Low concentration of Ca で フ ラ ッ シ ュ を line う と, release さ れ た Ca に よ っ て more に Ca が promote emission さ れ る た め S shape の time ever 経 が ら れ る も の と exam え ら れ る. こ の others に IP_3 に よ る Ca release に は Ca を interface す る 帰 経 road が し, also see か opened very に け urgent な IP_3 の dosage against 応 masato are が should ら れ る. こ の こ と は IP_3 に よ る Ca の limit bureau released が cell し た partly で こ り have る こ と を shown し て い る.

项目成果

飯野正光: "Caged compoundsを用いた新しい細胞内カルシウムストア機能研究法" 第83回日本薬理学会関東部会.

Masamitsu Iino：“使用笼状化合物研究细胞内钙储存功能的新方法”第 83 届日本药理学会关东地区会议。

飯野 正光: "Ca dependence of the Ca release from the smooth muscle Ca store induced by flash photolysis of caged inositol trisphosphate" Japanese Journal of Pharmacology. 55. 132 (1991)

Masamitsu Iino：“笼状肌醇三磷酸的闪光光解诱导的平滑肌钙储存释放的钙依赖性”日本药理学杂志 55. 132 (1991)。