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先天性免疫不全症におけるインタ-リウキン遺伝子導入の試み

将白细胞介素基因引入先天性免疫缺陷病的尝试

基本信息

批准号：
01570521
负责人：
宮川幸昭
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至 1990
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトインタ-リウキン(IL)遺伝子の導入を試みる前段階として、先天性免疫不全症のうち、B細胞欠損を伴うCVIDに焦点を定め、その病態生理を解明する目的と遺伝子導入に敵した細胞の選択のため、各種のサイトカン、ILを磁力線-ストロ-マ培養系に添加培養し、導入細胞の開発を目的とした。方法:ストロ-マ細胞(ST)の誘導は、われわれの開発した磁力線-ST法によった。正常対照群として、骨髄移植のドナ-、胎児骨髄を使用し、遺伝子導入対象として、免疫グロブリン補充療法中の4名の骨髄細胞を使用した。ST細胞源と、リンパ系幹細胞の分離は、パ-コ-ル比重遠心法によった。ST細胞の培養は、比重40%以上の細胞を線推芽細胞増殖因子(FGF)、IL-1、IL-5、IL-6の存在下で培養し、2週間の間隔で継代培養した。一方、リンパ系幹細胞の培養は、60%層をイムノビ-ズを使用して成熟リンパ球を除去した単核細胞に10%のST上清を添加培養し、6週以上培養した細胞をクロ-ニングし、リンパ系幹細胞源とした。結果(1)B細胞欠損型CVID(3/4)例はB細胞の育生を得意とするI型ストロ-マ細胞(長径100〜200um、短径20um)の欠損、または細胞育生能の欠落である可能性が極めて高い。I型ストロ-マ細胞はIL-6によく反応し、IL-6により反応性クロ-ンを誘導することができるがCVIDからは誘導することができなかった。(2)II型ST細胞(長径300〜500um、短径50〜100um)は主としてIL-5で誘導され、T細胞径幼若細胞の育生を得意とするがCVID(4/4)例で正常であった。以上よりB細胞欠損型のCVIDはIL-6反応性のI型ST細胞を補充することにより寛治が見込まれるため、IL-6を分泌していない胎児ST細胞にIL-6遺伝子を導入してfeeder layerを形成させ、CVIDのリンパ系幹細胞を培養することにより、明らかなB細胞の出現をみた。今後、CVIDの遺伝子導入療法の方法の治療指針となる可能性は極めて強いと考えられる。

The introduction of IL gene into the culture system is the first step of the experiment, the development of congenital immunodeficiency, the deficiency of B cells, the focus of CVID, the understanding of pathological physiology, the selection of target cells, the addition of IL gene into the culture system, and the development of introduced cells. Methods: ST cells were induced to develop by ST method. 4 bone marrow cells were used in normal control group, bone marrow transplantation, fetal bone marrow, gene transfer, and immunotherapy. The isolation of ST cell-derived stem cells from different stem cells ST cells were cultured in the presence of FGF, IL-1, IL-5 and IL-6 at intervals of 2 weeks. Culture of stem cells in 60% of layers, removal of mature cells, addition of supernatant of 10% of cells in culture for more than 6 weeks Results (1) The possibility of defective B cell growth and development in CVID(3/4) was extremely high. Type I cell lines IL-6 and IL-6 were induced. (2)II T cells (long diameter 300 ~ 500um, short diameter 50 ~ 100um) were mainly induced by IL-5, while CVID(4/4) was normal. The above CVID of B cell deficient type is supplemented with IL-6 reverse type I ST cells, and IL-6 secretion is introduced into fetal ST cells, and the feeder layer is formed. CVID of B cell line is cultured. In the future, CVID gene introduction therapy method of treatment guidelines, the possibility of extremely strong, examination, etc.