高性能アンペロメトリ-による糖類の超微量分析

使用高性能电流分析法对糖进行超痕量分析

• 批准号: 01571189
• 负责人: 本田 進
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01571189/
• 关键词: 高速液体クロマトグフィ-; 超微量分析; 電気化学的検出; パルスアンペロメトリ-; ニッケル電極; 金電極; 糖類; 糖タンパク質糖鎖

研究計画に沿い、金属電極を用いる酸化を利用した糖類の高感度検出の基礎研究を行い、パルス印加方式をとり入れて糖タンパク質糖鎖のピコモルレベルでの分析を実現することができた。以下に概要を述べる。1.ニケッル電極上での電解酸化ニッケル電極を試作し、種々の条件下で電解効率を調べた結果、強アルカリ水溶液が最も高い効率を与え、この電解酸化がNiO(OH)を経由する一連の反応に基づくものであり、水産基、アミノ基、スルフヒドリル基等の検出に有効であることがわかった。有機溶媒の添加は酸化反応を抑制するが、この抑制効果を最小限にとどめる条件もつきとめた。これらの結果に基づき、高速液体クロマトグラフィ-の種々のモ-ドで分離された糖をこの方法で検出したところ、ピコモルレベルでの定量が可能であった。2.パルスアンペロメトリ-による糖鎖分析金電極を用い、正電位で2段、負電位で1段のパルス電圧を一定周期で与え、第1段パルスの電解電位で発生する電流をシュミレ-トする方法により、糖質の微量検出を行うことができた。この方法は再現性がよく電極の耐久性も抜群であったので、糖タンパク質糖鎖を強アルカリを溶離液とする陰イオン交換クロマトグラフィ-で分離する系と結合させたところ、高性能パタ-ン分析が可能となった。この結果に基づき、種々の糖タンパク質にこの方法を適用したところ、生化学的に興味がもたれる多数の貴重なデ-タを得ることができた。この研究はさらに発展して、現在Johns Hopkins Uniuersity(アメリカ合衆国)のY.C.Lee教授との共同研究に発展している。

Research projects に along the electrode を use い い, metal る acidification を using し た sugar の Gao Gan degrees 検 を line い の basic research, パ ル ス Inca ways を と り into れ て sugar タ ン パ ク quality sugar lock の ピ コ モ ル レ ベ ル で の analysis を be presently す る こ と が で き た. The following に summary を describes べる. 1. ニ ケ ッ ル electrode で の electrolytic acidification ニ ッ ケ ル を try し, kinds of electrode 々 の を で electrolytic sharper rate under the condition of adjustable べ た results, strong ア ル カ リ が aqueous solution, the most high も い を and え working rate, こ の electrolytic acidification が NiO (OH) を 経 by す る の in a row against 応 に base づ く も の で あ り, aquaculture base, ア ミ ノ base, ス ル フ ヒ ド リ ル base etc. の 検 に there were The effect is である とがわ った. The <s:1> addition of <s:1> acidification of organic solvents has a 応を inhibitory effect on するが, and the を minimum limit にと <s:1> める める conditions for the inhibitory effect of <s:1> are にと and める める. こ れ ら の results に づ き, high-speed liquid ク ロ マ ト グ ラ フ ィ - 々 の の モ - ド で separation さ れ た sugar を こ の way で 検 out し た と こ ろ, ピ コ モ ル レ ベ ル で の quantitative が may で あ っ た. 2. パ ル ス ア ン ペ ロ メ ト リ - に よ る lock analysis gold electrode を sugar with い, are potential で 2, 1 negative potential で paragraphs の パ ル ス electric 圧 を period で paragraph 1 and え, パ ル ス の electrolytic potential で 発 raw す る current を シ ュ ミ レ - ト す る method に よ り, sugar の trace 検 を row う こ と が で き た. こ の way は reproducibility が よ く electrode の durability も sorting group で あ っ た の で, sugar タ ン パ ク quality sugar strong lock を ア ル カ リ を dissolved from the liquid と す る Yin イ オ ン exchange ク ロ マ ト グ ラ フ ィ separation - で す る department と combining さ せ た と こ ろ, high-performance パ タ - ン analysis が may と な っ た. こ の results に づ き, kind of 々 の sugar タ ン パ ク qualitative に こ の way を applicable し た と こ ろ, biochemistry に tumblers が も た れ る most valuable な の デ - タ を have る こ と が で き た. こ の research は さ ら に 発 exhibition し て, Johns Hopkins now Uniuersity (ア メ リ カ) of the United States の Y.C.L ee professor と の joint research に 発 exhibition し て い る.

项目成果

S.Honda,S.Suzuki and Y.Okada: "Application of Nickel-Electrode Oxidation to Miero Analysis of carbohydrates in Hish Pertormance Leguid Chromatography" J.Chromatoys.

S.Honda、S.Suzuki 和 Y.Okada：“镍电极氧化在高效液相色谱中碳水化合物微观分析中的应用”J.Chromatoys。

S.Honda,S.Suzuki,S.Zaiki,and K.Kakeri: "Analysis of N-and O-Glycosidically Bound Sialic Acid-containing Oligosaccraridas in Glycoproteins by High-Perfornrance Liquid chrornafograpry with Pulse Amperonietric Detection" Anal.Biochem.

S.Honda、S.Suzuki、S.Zaiki 和 K.Kakeri：“通过高性能液体色谱法和脉冲安培检测分析糖蛋白中 N 和 O 糖苷结合的唾液酸寡糖” Anal.Biochem。

本田進: "糖類の高速液体クロマトグラフィ-(総説)" バイオサイエンスとインダストリ-. 47. 11-17 (1989)

Susumu Honda：“糖的高效液相色谱（评论）”《生物科学与工业》47. 11-17 (1989)。