デオキシヌクレオシドミリン酸プ-ルの不均衡が誘導するDNA二本鎖切断酵素の解析

脱氧核苷多米酸盐池失衡诱导的 DNA 双链断裂酶分析

• 批准号: 01571208
• 负责人: 綿矢 有佑
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01571208/
• 关键词: デオキシヌクレオシドミリン酸; dNTPプ-ル; 不均衡; ヌクレオシド代謝; 5-フルオロデオキシウリジン; 細胞死; DNA二本鎖切断; エンドヌクレア-ゼ

マウス乳癌由来FM3A細胞に5-フルオロデオキシウリジンを作用させ細胞内dNTPプ-ルの不均衡を起こさせた。この細胞を超音波で破壊した後、10万gで遠心し上清を調製した。次いでこの上清をDEAE-アガロ-スカラムクロマトグラフィ-(食塩濃度匂配)にかけたところ5mMNaclで溶出された分画にDNA二本鎖切断酵素活性があった。さらにこの画分をハイドロキシアパタイトカラムクロマトグラフィ-(10mM→400mMリン酸カリウム濃度匂配)で部分精製を行った。酵素(endo nuclase)活性は200mMリン酸カリウムで溶出される分画に見い出された。SPS-PAGEでこの分画を分析したことろ6本のバンドが銀染色で観察された。このdNTPプ-ルの不均衡によって誘導されるendo nuclaseの性質をFM3A細胞のDNA及びMl3ファ-ジDNAを基質として調べた。その結果、この酵素は二本鎖DNAを特異的に切断すると共に一本鎖DNAの高次構造を認識して切断する活性を有することが判った。一方dNTPプ-ルの不均衡時に細胞内に出現するDNA二本鎖断片の5'末端分析をTLC及びHPLCを併用して分析した。5'未満の塩基はチミンとアデニンで全体の70%をしめた。分析結果はアデニン:36%、チミン:34%、シトシン:18%及びグアニン:12%であった。この実験によりdNTPプ-ルの不均衡時に生じるDNA鎖切断はDNAの特異的な部位で起きているものと考えることができる。

It is derived from FM3A breast cancer cells and plays an important role in the development of intracellular dNTP imbalance. The ultrasonic wave is transmitted to the cell, and the 100,000 g is transmitted to the supernatant. In the second phase, the supernatant was DEAE-5mMNacl-5mMNacl-5 mNacl In addition, the purification of the product was carried out in the presence of a mixture of 10mM and 400mM hydrochloric acid in the presence of a mixture of 10mM and 400mM hydrochloric acid. Enzyme (endo nuclase) activity was 200mM and the enzyme was dissolved in the medium. SPS-PAGE was used to analyze the silver stain. The DNA of FM3A cells and the DNA of M13 cells are regulated by the disequilibrium of dNTP. As a result, the enzyme has a specific cleavage activity. Analysis of 5'-terminal DNA duplex fragments occurring in cells when dNTPs are not in equilibrium by TLC and HPLC 5 ' The analysis results showed that:36%; 34%; 18%; and 12% respectively. The DNA lock is broken when the DNA is not in equilibrium.

项目成果

M.Yamata,Y.Hirota,J.Sakai,K.Hashigaki,H.Hayatsu and Y.Wataya: "Cethal DNA Double Strand Breaks in Mouse mammary Tumor FM3A cells Treated in vitro with Anti-Neoplastic Tropolone,a,a-Bis-(2-hydroxyt-isopropyetron-3yl)4-methoxytsluene(JCI-3661)" Camcer Res.

M.Yamata、Y.Hirota、J.Sakai、K.Hashigaki、H.Hayatsu 和 Y.Wataya：“用抗肿瘤托酚酮、a,a-Bis 体外处理的小鼠乳腺肿瘤 FM3A 细胞中 Cethal DNA 双链断裂

H.Hirota,A.Yoshioka,S.Tanaka,K.Watanabe,T.Otani,J.Minowada,A.Matsuda,T.Ueda and Y.Wataya: "Imbalance of Deoxyribonucleoside Triphosphates,DNA Double-strand Breaks,and Cell Deaih Caused by 2-chlorodeoxy a denosine in Mouse FM3A cells." Cancer Res.49. 915-9

H.Hirota、A.Yoshioka、S.Tanaka、K.Watanabe、T.Otani、J.Minowada、A.Matsuda、T.Ueda 和 Y.Wataya：“脱氧核糖核苷三磷酸的不平衡、DNA 双链断裂和细胞

Y.Wataya,Y.Hirota,A.H-Yoshioka,T.Otani,J.Minowada,A.Matsuda and T.Ueda: "The Mechanism of 2-chlorodeoxyadenosine-induced cell Death" Human Purine and Pyrimidine Metabolism V1,Part B.(New,York,Plenum Publishing Corp.). V1. 227-234 (1989)

Y.Wataya、Y.Hirota、A.H-Yoshioka、T.Otani、J.Minowada、A.Matsuda 和 T.Ueda：“2-氯脱氧腺苷诱导细胞死亡的机制”人体嘌呤和嘧啶代谢 V1，B 部分。

Y.Wataya,L.Watanabe,S.Yoshida and A.H-Yoshioka: "dNTP impalance and DNA Double Strand Breaks in Mouse FM3A cells and the Mechanism of cell Death" Nucleic Acids Res.21s. 11-12 (1989)

Y.Wataya、L.Watanabe、S.Yoshida 和 A.H-Yoshioka：“小鼠 FM3A 细胞中的 dNTP 不平衡和 DNA 双链断裂以及细胞死亡的机制”核酸 Res.21s。